小分子干扰RNA特异性抑制人胰腺癌细胞株PANC-1突变型K—ras基因表达的探讨.pdfVIP

维普资讯 2006年第 33卷第 19期 中国肿瘤 临床 ·1081· 论 著 小分子干扰 RNA特异性抑制人胰腺癌细胞株 PANC一1突变型 K—ras基因表达的探讨 摘要 目的：研究小分子干扰 RNA(smallinterferingRNA，siRNA)对人胰腺癌细胞株 PANC—l中突变型 K—ras 基 因表达的抑制作用。方法：构建真核表达载体 pSilencer3．1一K—ras“，转染PANC一1细胞后应用 RT—PCR及 Western blot检测突变型 K—ras基因mRNA及蛋 白质表达变化 ：噻唑蓝(MTT)测定细胞生长曲线：流式细胞仪测定细胞凋亡 率 结果：测序证实siRNA真核表达载体构建成功 。RT—PCR光密度比值结果空载体组、阴性对照组、实验组分别为 ： 95．3％±2．5％、97．6％±2．8％、40．1％±3．1％，差异有统计学意义 (P0．05)；Westernblot灰度 比值结果空载体组 、阴性对照 组、实验组分别为 ：96．1％±2．2％、98．5％±2．0％、36．5％±3．2％，差异有统计学意义(PO．05)；实验组细胞生长受到明显 抑制 ．凋亡率较对照组明显升高(PO．05)。结论 ：pSilencer3．1-K—ras“能有效抑制突变型K—ras基 因在人胰腺癌细胞 株 PANC一1中的表达 ，抑制细胞生长 ，诱导细胞凋亡，为肿瘤的生物学治疗提供 了新的方法。 关键词 siRNA K—ras基 因 PANC一1细胞 中图分类号 ：R735．9 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—8179(2006)19—1081—04 TheStudyofSpecificInhibitionofMutantK-rasGeneExpressionby ShortInterferingRNAsinHumanPancreaticCarcinomaCellPANC--1 ZhangZhiping JiangGuanchao WangJun DepartmentofThoracicSurgery,PekingUniversityPeople Hospital，Beijing Abstract Objective：TostudythespecificinhibitioneffectofshortinterferingRNAs(siRNA)on themutantK—rasgeneexpressionin PANC-1cells．M ethods：Onepairof63bpreverserepeatedse— quencetargetingmutantK-ras mRNA weresynthesizedand inserted intoplasmidpSilencer3．1eu— karyoticexpressionvector．AftertransfectionintoPANC一1cells．theexpressionofK—rasgenewasde— tectedusingRT——PCR andW esternblottechniques．TheeffectofcellproliferationwasstudiedbyMTF test．Flow cytometrywasused todetecttheapoptosisoftransfected cells．Results：Therecombinant plasmidpSilencer3．1一K—ras他wassuccessfullyconstructedbythesequencing．TheintroductionofpSi— len