索拉非尼逆转肝癌细胞株HepG2%2fGEM耐药作用实验研究.pdfVIP

其他 二鬻鬻鍪舞 索拉非尼逆转肝癌细胞株HepG2／GEM耐药作用的实验研究 丁晓蕾，张阳，吴涛 (大连医科大学附属第二医院肿瘤科，大连116027) 原发性肝细胞性肝癌(hepatocellular／(正常对照组oD值一空白对照组oD值)*100％。根 carcinoma，HCC，以下简称肝癌)是临床上最常见的据实体瘤体外敏感标准12]，选出较敏感药物(即GEM) 恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率逐年增加。化学治 诱导耐药细胞株。 1．3．2 疗在肝癌治疗中占有重要位置，但肿瘤细胞的多药 HepG2／GEM细胞系的建立 耐药性常导致化疗失败。耐药逆转剂的应用是克服 采用药物大剂量冲击方法诱导产生耐药细胞 肿瘤多药耐药性的重要手段，但多数多药耐药逆转 系。将细胞接种于含44u GEM的培养基中培 g／ml 剂均因毒副作用较大而限制了临床的广泛应用。目 养。24小时后换无药培养基，直到细胞完全恢复正常 前，有研究报道细胞信号传导通路抑制剂能够逆转 生长，并长满约80—90％培养瓶底(约2-4周)，再用 p 肿瘤多药耐药性。索拉非尼是一多靶点抗肿瘤药物， 含44g／mIGEM培养基继续冲击细胞，重复上述过 能够通过抑制ERKI／2信号传导通路发挥抗肿瘤作 程四次后完全恢复正常生长的细胞为HepG2／GEM。 用。本文旨在研究索拉非尼逆转人肝癌耐药细胞株 1．3．3 耐药性的作用及其可能机制。 抑制率 材料、对象与方法 1材料与方法 L1细胞株：人肝癌细胞株HepG2，购自上海中国科的索拉非尼培养72h。求得抑制率。利用spss软件计 学院细胞库，用IMDM(含IO％FCS)培养。 1．2主要试剂：吉西他滨(江苏豪森)，奥沙利铂、伊耐药株IC50／亲本株ICSO。 立替康(江苏恒瑞)，表阿霉素(浙江海正)，紫杉醇1．3．4 (太极集团)，Sorafenib(Bayer公司)；逆转录一聚合影响 酶链反应RT-PCR试剂盒购自TaKara宝生物工程有将两株细胞接种于96孔板，以两株细胞分别用 或不用索拉非尼处理分为四组。按照分组情况加入 限公司；山羊抗人P—gP、VEGFR2单克隆抗体购自美 国LABVISION公司；通用型S-P9000试剂盒购自北 实验药物，继续培养72h(吉西他滨终浓度分别为： 京中杉生物公司。 160．0、40．O、10．0、2．5、0．64、0．16pg／m1，索拉非 1．3方法 尼：抑制率10％左右的索拉非尼浓度，即lmg／L)。计 1．3．1 MTT法检测BepG2细胞株对化疗药物的敏感算耐药倍数、逆转倍数、相对逆转率。[逆转倍数=耐 性(72小日寸) 取对数生长期的细胞，以最佳浓度1×105／ml u 接种于无菌96孔培养板中，i00i／孔。药物处理组 ×i00％]。 分为五组，即：吉西他滨、伊立替康、紫杉醇、奥沙利 1．3．5 铂、表阿霉素。按分组情况分别加入化疗药100IIi／ 将两株细胞分别用或不用索拉非尼处理分为四 孔，使其终浓度为1×血浆峰浓度(PPC)：吉西他滨 25u u g／ml、伊立替康7．7g／ml、紫杉醇4．5ug／ml、