致病性猪伪狂犬病病毒PRV-JF株的分离和鉴定.pdfVIP

中国畜牧兽医学 畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学 兽医免疫分 第七次研讨 会论文集 致病性猪伪狂犬病病毒 PRV-JF 株的分离与鉴定 张超范，刘长明* ，危艳武，刘霓虹 ( 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/ 猪传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 15000 1) 摘 要：从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中，经聚合酶链式反应(PCR) 证实为猪伪狂犬病病 毒(PRV) 野毒感染，采用无PCV1 污染的猪肾细胞系(PK-15)分离培养，经蚀斑克隆纯化,培育一株细胞培养适应 毒，命名为PRV-JF 株。分离株经细胞培养传代，能够产生典型的细胞病变，病毒滴度随代次显著增加，第24 8.5 代毒价达 10 TCID /mL 。免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA) 检 病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质内。 50 病毒感染细胞可被已知PRV 阳性血清中和。电镜负染观察到病毒粒子呈椭圆或圆形外观，无囊膜的病毒粒子 直径约 110 nm 150 nm ，有囊膜的成熟病毒粒子直径约 150 nm 180 nm 。PCR 鉴定该毒株含有gE 基因，其序 列与GenBank 登录的7 株PRV 同源性为97.7 100 % 。 用不同剂量病毒培养物接种家兔于24 h 72 h 内全部 。 ， ，为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗 死亡 研究表明 PRV-JF 分离株对易感动物具有高致病性 免疫与诊断研究奠定基础。 关键词：猪伪狂犬病病毒；强毒株；分离；鉴定 猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies 疫苗免疫与诊断研究奠定了基础。 virus ，PRV) 引起的一种危害严重的急性传染病， 要以新生仔猪的急性死亡及4 周龄以上的仔猪出现 1 材料和方法 神经症状，妊娠母猪以繁殖障碍、流产、死胎及呼 吸道症状为特征。猪是PRV 的贮存宿 ，是引起多 种动物发病的 要宿 和带毒 ，在本病的传播中 1.1.1 病料处理：将吉林某猪场临床疑似猪伪狂犬 起着重要作用。未经疫苗免疫的猪群，初次暴发本 病发病仔猪的脑组织病料，用RPMI 1640 培养液研 病 带来灾难性后果，新生仔猪死亡率高达 100 % ， 磨成 10 %乳剂，以4 000 r/min 离心30 min 取上清， 育肥猪生长停滞，增重缓慢，母猪繁殖障碍等，造 用0.22 滋m 滤膜除 ，用于病毒分离。 [ 1] ，但毒 成巨大的经济损失 。PRV 只有一个血清型 经 1.1.2 细胞培养：猪肾传代细胞系(PK-15) ， PCR 株 毒力差异较大。国内普遍采用PRV 基因缺失疫 法检测无PCV1 和支原体污染，用于病毒培养。细 苗预防本病，也有采用PRV 为载体表达外源病毒基 含 、青 胞培养液为RPMI 1640 ， 5 %灭