利用聚丙烯酰胺凝胶电泳研究硫酸软骨素酶的性质.pdfVIP

现代食品科技 ModernFoodScienceandTechnology 2015，Vo1．31，No．3 利用聚丙烯酰胺凝胶电泳研究硫酸软骨素酶的性质 王莹 ，王凤舞 ’，赵雪 (1．青岛农业大学食品学院，山东青岛266109)(2．中国海洋大学食品学院，山东青岛 266003) 摘要：本文运用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)研究了RC3菌株所产硫酸软骨素A酶 (CSAase)的部分酶学性质。通过对菌株 RC3进行菌种活化、扩大培养和发酵产酶培养，再通过对微生物菌体进行超声波破碎获得胞内粗酶液，将其与硫酸软骨素A等体积 混合，反应后通过PAGE研究各条件对酶活力的影响。结果表明，RC3菌株所产硫酸软骨素A酶的最适反应温度为20-40。C，最适 pH值为8．0，镁离子是该酶的激活剂，铜离子和锌离子是该酶的抑制剂，钾离子、钙离子、钠离子、锰离子和钡离子对该酶活力没有 显著影响；当镁离子浓度为 10mM 时对该酶表现出最强的激活作用；当铜离子和锌离子的浓度为5mM时对该酶活力表现出强烈的 抑制作用；在上述最优条件下，该酶作用4h后获得的低分子量产物比大分子CSA具有更好的抗氧化活性。上述研究结果对该CSAase 的应用奠定基础。 关键词：酶学性质；硫酸软骨素酶；聚丙烯酰胺凝胶电泳；抗氧化活性 文章篇号：1673．9078(2015)3—97—102 DOI：10．13982／j．mfst．1673—9078．2015．3．017 PropertiesofChondroitinaseUsingP0lyacrylamideGelElectrophoresis WANGYing，WAN GFeng-wu，ZHAO Xue‘ (1．CollegeofFoodScienceandTechnology，QingdaoAgricultmalUniversity，Qingdao266109，China) (2．CollegeofFoodScienceandTechnology，OceanUniversiytofChina，Qingdao266003，China) Abstract：Inthisstudy,polyacrylamidegelelectrophoresis(PAGE)wasusedtoexploretheenzymaticpropertiesofchondroitinaseA (CSAase)producedbystrainRC3．Acrudesolutionofintracellularchondroitinasewasobtainedbyultrasonicationofthemicrobialcells，which wasthenmixedwithanequalvolumeofchondroitinsulfateA(CSA)andincubatde．Theeffectofvariouscultureconditionsonenzymeactivity wasstudiedusingPAGE．TheresultsshowedthattheoptimaltemperatureandpHvalueforfermentationofCSAasewere20℃to40℃ and8．0． respectively．Magnesium ionwasfoundtoactivateCSAase，whilecopperandzincionsweresrtonginhibitors．Potassium，calcimu ，sodium， mangna ese，nadbarium ionsdidnotsignificnatlyaffectenzymeactivity．Magnesium ionsataconcentrationof10mIVlshowedthesrtongest activatingeffectonCSAase．Copperandzincionsshowedsrtonginhibitoryeffectontheenzymeactivityataconcentrationof5mM ．Underthe aboveoptimalconditions。thelow—molecular-weightproductsthatwereobt