口服用阿胶低肽制备工艺研究.pdfVIP

2009·全国中药创新与研究论坛·论文集 ‰ ∞ ¨ _ m m m 。 图2．3．2黑曲霉降解百药煎的高效液相叠加色谱图 分别将安琪酿酒曲、黑曲霉在相同的条件下发酵，每隔12h取样分析，可看出随发酵时间延长， 主要成分五倍子鞣质逐步降解，没食子酸含量逐步增加，此变化趋势与采用酵曲发酵获得的液相叠 加图的结果类似，说明黑曲霉确实是百药煎发酵过程中的关键菌株。 3结论 因不同的微生物具有不同的酶系，所产生的酶的种类及数量均不相同，所以经过微生物在药材 表面的生长情况分析和高效液相色谱分析，最终将百药煎发酵过程中的关键菌株定为黑曲霉。 参考文献： [1】江苏新医学院编，中药大辞典(上册)[z】．上海：上海科学技术出版社，2001：391． [2】2瞿燕，五倍子发酵工艺及药理实验研究to]．成都：成都中医药大学，2002． 【3】周德庆，微生物学实验教程[M】．北京：高等教育出版社，2006：3l-40． [4】沈萍，陈向东，微生物实验教程瞰】．北京：高等教育出版社，2007：25q5． 口服用阿胶低肽的制备工艺研究 付英杰 田景振 (山东中医药大学药学院，山东济南250355) 摘要：目的优选阿胶酶解条件、酶提液的超滤工艺，口服用阿胶低肽的制备工艺。方法首先对阿胶5％水溶液用硫 酸铵进行提取前处理；然后以考马斯亮蓝测定的总肽浓度为指标，对胃蛋白酶酶量、胃蛋白酶酶解时间、胰蛋白酶 酶量及胰蛋白酶酶解时间4个因素设计正交试验确定最佳酶解工艺：最后考察超滤工艺。结果硫酸铵用浓度30％ 进行提取前处理以去除油脂等杂质，并用分子量截留值为3kD的超滤柱进行脱盐；考察口服用有效分子量为小于 5kD；最佳酶解工艺组合为提取温度为42℃、提取pH值为2．0(胃蛋白酶)和8．0(胰蛋白酶)、蛋白酶酶量10万 u儋、胃蛋白酶酶解时间为2小时、胰蛋白酶酶量为5千u儋、胰蛋白酶酶解时间3小时；超滤工艺为用5kD超滤柱， 收集浓集液及一次水洗液。结论制备了口服用阿胶低肽，此制备方法效率高，工艺合理，得到的有效成分较纯。 关键词：阿胶低肽；酶解；超滤 127 2009·全国中药创新与研究论坛·论文集 asinus 阿胶，为马科动物驴(EquusL．)的皮经煎煮、浓缩、晾干制成的固体胶。性甘平。功效 补血止血、滋阴润燥。以山东东阿生产的阿胶最为著名【l】。经现代研究，证明阿胶中主含氨基酸和 肽类12]，占干重的80％。另外含多种微量元素，以Fe、Cu为最高。阿胶中大分子物质需要在蛋白 酶的作用下分解为小分子肽或氨基酸才能被吸收，要消耗一定量的蛋白酶，所以有“滋腻碍胃”之说。 此外，阿胶中含有油脂、糖类等附加剂或杂质。现已有含量测定方法学的研究，且已经过预试获得 了一定样品。本实验结合阿胶及其有效成分的性质，利用生物酶解【3书可胶蛋白，并去除油脂和糖类 杂质以提升口服制剂澄明度和稳定性。酶提取可将蛋白变为低分子的肽，容易被吸收发挥药效。因 此本制备工艺将制成口服用阿胶低肽，有利于提高吸收效率，更真实的认识进入机体发挥作用的药 效成分及其作用的机理。 1仪器与试剂 1．1仪器SYC．15超级恒温水浴(南京桑力电子设备厂)；LD4．2A低速离心机(北京医用离心机厂)； PHS．3C精密型pH计(上海三信仪表厂)；中空纤维超滤装置(北京市旭邦膜设备有限责任公司)。 Biotech批 BrilliantBlueG．250U仃a 号：B67328上海，七工生物工程有限公司)；考马斯亮蓝(Coomassie Pure批 号：0241875上海生工生物工程有限公司)；蒸馏水，购于济南诚信化玻公司；其他试剂均为分析纯。 1．3动物昆明种小鼠(雄性，体重20一229)由山东中医药大学动物供应中心提供。 2方法与结果 2．1酶解前处理 临床使用方法多为烊化法，且浓度多为5％。我们将阿胶采