重庆地区127例非小细胞肺癌患者EGFR基因突变分析.docVIP

重庆地区127例非小细胞肺癌患者EGFR基因突变分析 　　[摘要]目的研究重庆地区非小细胞肺癌（NSCLC）患者表皮生长因子受体（EGFR）基因突变情况。方法收集127例NSCLC患者不同来源的标本，提取DNA，采用扩增组织突变系统（ARMS） PCR法检测样品中EGFR基因18、19、20及21外显子的常见29种突变，并进一步分析其突变与临床特征的关系。结果 127例NSCLC肺癌患者中，EGFR突变患者56例，阳性率为44.1%。突变以19号外显子缺失突变以及21号外显子L858R突变为主，占85.7%。样本来源方面，胸水（16/28 57.1%）和新鲜组织（10/18 55.6%）阳性率最高。女性患者突变率67.9%（36/53）高于男性27.0%（20/74），（P0.05）。有吸烟史突变率为26.9%（18/67），无吸烟史为63.3%（38/60），（P0.05）。腺癌突变率为47.3%（54/114）；鳞癌1为18.2%（2/12），腺鳞癌1例，为阴性， （P0.05）。结论 EGFR基因突变率为44.1%，以19号外显子缺失突变以及21号外显子L858R突变为主，突变多发生在非吸烟的腺癌女性患者。对于细胞学样本，胸水也可以作为一个较好的来源。 　　肺癌是威胁人类健康的主要恶性肿瘤，非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）约占肺癌的80%以上。能够手术的非小细胞肺癌预后相对较好，但仍有30%左右早期肺癌在5年内死亡[1]。早期肺癌缺乏特异的临床症状而很难被发现，大部分患者被发现时已属中晚期，失去了手术根除的机会，而以铂剂为基础的常规化疗无法对中晚期无法获得长期疗效，预后极差[2]。 　　自1982年酪氨酸激酶家族被发现后，表皮生长因子受体（epidermal growth factorreceptor， EGFR） 作为该家族的一个代表成员广受关注，它的异常表达和活化在肺癌的发生、发展中起着重要的作用[3]。针对EGFR的靶向药物，EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI）如：西妥昔单抗（cetuximab）、吉非替尼（gefitinib）、厄洛替尼（erlotinib）等开始用于治疗NSCLC。但在临床应用中发现，TKI治疗的有效率仍不尽人意。2004年，两个研究均证明了EGFR基因激酶区的突变与NSCLC患 　　者对TKI类药物的反应密切关系 [4，5]。因此通过患者EGFR基因检测指导临床TKI类靶向药物的应用，筛选合适的患者，可显著提高药物疗效，并减少不敏感患者的资源浪费。本研究检测了重庆地区127名NSCLC患者不同标本类型EGFR基因突变情况，并分析其与患者临床特征的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本收集重庆医科大学附属第一医院临床分子医学检测中心2011年5月至2013年7月NSCLC患者标本127例，以及患者的临床资料。标本来源： 石蜡切片29例，新鲜组织18例，纤支镜抽吸物36例，胸水28例，痰11例，淋巴结2例，心包积液2例，腹水1例。各类标本均由两名病理医生根据WHO肺肿瘤组织学分型诊断确认。其中，男性74例，女性53例，男女比例1.4：1，中位年龄63（20-86）岁。 　　1.2 DNA提取石蜡组织运用二甲苯脱蜡后，用厦门艾德AmoyDxFFPE DNA分离试剂盒（离心柱型）提取DNA。非石蜡组织用厦门艾德AmoyDx组织样品DNA分离试剂盒（离心柱型）提取DNA。以Nano-100分光光度计测定提取后DNA的纯度及浓度。 　　1.3 EGFR基因突变分析采用扩增组织突变系统PCR法（amplification refractory mutation system，ARMS-PCR）法检测EGFR基因18、19、20 及21外显子的常见29种突变。试剂盒采用厦门艾德AmoyDx人类EGFR基因突变荧光PCR检测试剂盒。石蜡切片样品DNA浓度稀释到1.5～2ng/L，非石蜡切片样品DNA浓度稀释到0.4～0.6ng/L。反应循环参数： 95℃ 5min，1个循环； 95℃ 25s，64℃ 20s， 72℃20s， 15个循环； 93℃ 25s， 60℃ 35s，72℃ 20s，31个循环。按照试剂盒说明书判定检测结果。为保证质量控制，每批测定均带有1个阴性对照和1个阳性对照，阴性对照为ddH2O，阳性对照为质量稳定的经序列测定确定突变型的阳性标本。 　　1.4 统计学方法采用SPSS 13.0 软件进行χ2检验以及方差分析 　　2 结果 　　2.1 EGFR各位点突变率及突变类型 　　127例NSCLC患者中，EGFR突变患者56例，阳性率为44.1%。其中19号外显子缺失突变（19-Del）27例；21号外显子突变23例，