基于VBL增白剂细胞染色的水稻原生质体细胞壁变化检测.pdfVIP

贵州农业科学 2014，42(11)：7O～72 GuizhouAgriculturalSciences [文章编号31001—3601(2014)110672—0070—03 基于VBL增 白剂细胞染色的水稻原生质体细胞壁变化检测 柳 琳 。 ，陈 越 ，陈 玲 ，李维蛟 ，程在全。 ¨ (1．云南大学 ，云南 昆明 650091；2．云南省农业科学 院 生物技术与种质 资源研 究所 ，云南 昆明 650223； 3．云南省农业生物技术重点实验室，云南 昆明650223；4．云南 昆明农业部西南作物资源与新种质创制 重点实验室 ，云南 昆明 650223) [摘 要]为快速、准确地观察水稻原生质体制备及培养过程 中水稻细胞壁的去除和再生情况，利用荧 光增 白剂 VBL细胞壁染色液对细胞进行染色，制片后置于激发波长为 345nm、发射波长为430nm 的荧光 显微镜下观察。结果发现，在原生质体制备过程 中，细胞周 围发出的蓝色荧光初期表现分布均匀且荧光强 烈 ，之后逐渐变为分布不均匀且荧光暗淡，最后蓝色荧光消失，表明纤维素逐渐被酶解去除；在原生质体培养 过程 中荧光情况与制备过程的刚好相反。结论 ：利用荧光增 白剂 VBL细胞壁染色液染色通过荧光强弱变化 对比，可以快速、准确地检测水稻原生质体制备及培养过程 中细胞壁的变化。 [关键词]水稻 ；原生质体 ；细胞壁 ；荧光增 白剂；检测 [中图分类号]s511 [文献标识码]A DetectionofRice ProtoplastCellW allStainedwith FluorescentW hiteningAgentVBL LIU lin。一，CHENyue。。”，CHEN Ling，。”，LIWeijiao’。”，CHENGZaiquan，。， (1．YunnanUniversity，Kunming，Yunnan650091；2．Instituteof曰fDfec矗DZogj，andGermplasmResources，Yunnan Academyof AgriculturalSciences，Kunming，Yunnan 650223；3．YunnanKeyLaboratoryof Agricultural BiologicalTechnology，Kunming，Yunnan650223；4．KunmingKeyLaboratoryofSouthwestCropsResourcesand NewGermplasm Innovation，MinistryofAgriculture，Kunming，Yunnan650223，China) Abstract：Thericecellsstainedwith fluorescentwhiteningagentVBL wereobservedbyfluorescence m icroscopewith345nm excitationwavelength and 430nm emissionwavelengthtoobserveelimination and regeneration ofrice cellwalls during preparation and culture process of rice protoplasts rapidly and accurately．Thebluefluorescencearoundcellsrepresentsdistributionequalityandintensityfluorescenceat earlystage，graduallymal—distributionanddim fluorescence，andfinallythebluefluorescencedisappears， which indicates that cellulose iS gradually eliminated by enzymolysis． but the blue fluorescence performanceintheprotoplastcultureprocessisjusttheoppos