虫媒介黄病毒基因3%27末端通用引物在禽黄病毒RT-PCR检测中应用.pdfVIP

福建省畜牧兽医学会2011年学术年会论文集 虫媒介黄病毒基因3’末端通用引物 在禽黄病毒RT—PCR检测中的应用① 王劭②1，一，陈仕龙1”，陈少莺③1，_，程晓霞1，一， 林锋强1”，朱小丽1，江斌1，李兆龙1 (1福建省农业科学院畜牧兽医研究所 2福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福州，350013) flavivir- [摘要]将虫媒介黄病毒基因3’末端通用引物EMFl／VD8做为鉴别引物，以鸡黄病毒(chicken 毒(duck 离毒、1株DFV分离毒和5份人工感染鸡卵泡与输卵管组织匀浆进行检测均为阳性。表明虫媒介黄病毒RT —PCR通用引物可用于鸡(鸭)黄病毒的临床诊断和流行病学调查。 (关键词]鸡黄病毒；RT—PCR；检测 禽黄病毒病是由黄病毒科黄病毒属新型禽黄病 差异率超过20％，因此很难根据虫媒介黄病毒属各 毒引起一种鸡、鸭和鹅发热、产蛋急降、采食减少的病 分离株的基因序列设计RT—PCR通用引物，这也限 毒性传染病，病禽主要出现卵泡出血、萎缩，部分卵黄 制了一次检测中可鉴别的黄病毒种类。PierreV等 破裂，并形成卵黄性腹膜炎，该病已在我国广泛流行， (1994年)设计了虫媒介黄病毒基因3’末端通用引 给养禽业造成重大经济损失¨。J。 物(EMFl／VD8)，建立了可同时检测四种血清型登革 根据国际病毒分类委员会(ICTV)的标准，黄病 热病毒、黄热病病毒、日本脑炎病毒、寨卡病毒和西尼 virus 毒属包括登革热病毒群(Denguegroup)、日本脑 virus 炎病毒群(Japaneseencephalitisgroup)、黄热病 V等的报道，将cFv基因3’末端区段作为RT—PCR fevervirus 病毒群(Yellow group)和恩他耶病毒群 virus 诊断的靶区段，EMFl／VD8做为检测鸡黄病毒的引 (Ntayagroup)等多个群，包含60多个成员。不 同黄病毒群各分离株核苷酸序列同源性低于40％．物，评价其在禽黄病毒病RT—PCR检测中的应用价 同一病毒基因型不同分离株核苷酸序列型内变异的 值，为禽黄病毒的分子流行病学调查奠定基础。 ①基金项目：福建省农科院创新团队项目(STIF—Y02)和福建省公益类科研院所专项(201lRll01031—4) ②作者简介：王劭(1979一)，男，硕士，福建福州人，助理研究员，主要从事分子病毒学研究。 22· 虫媒介黄病毒基因3’末端通用引物在禽黄病毒RT—PCR检测中的应用 1 材料与方法 毒(GPV)、新城疫病毒(NDV)、鸡传染性喉气管炎病 1．1试剂 Trizol购自Invitrogen公司，反转录试剂盒(M—征病毒(EDSV一76)由本研究室提供。 DNA MLV)购自Promega公司，dNTPs、TakaRarTaq 1．3虫媒介黄病毒RT—PCR通用引物 聚合酶购自宝生物工程(大连)有限公司，胶回收试 根据PierreV等报道的虫媒介黄病毒反转录聚 合酶链式反应(RT—PCR)通用引物(见表1)H-63来 剂盒购自Omega公司，蛋白酶K购自厦门泰京生物 公司。蛋白核酸测定仪购自德国EppendorfBiopho—检测禽黄病毒，同时选用黄病毒基因3’末端通用引 tometer公司。 物EMFl／VD8做为CFVRT—PC