HCV-HVR1抗体异质性酶联矩阵检测及其临床初步应用.pdfVIP

筮螋旦生国瘟垂丝压缝塑墓滋痘塞堕室途堑生蝤压商缝途堑 菌检测阴性。德国常采用3种抗真菌药物一两性霉 唑，脑脊液隐球菌阴转时间为(48±32)d，痊愈率 素B、氟胞嘧啶和氟康唑联合治疗脑膜炎，三联治疗 85％，与国外的报道相近。值得一提的是，40例患 使脑膜炎的痊愈率达到80％左右，因而可能略高于 者中，有23例合并其他机会性感染，因而可能成为 美国常采用的两件霉素B和氟胞嘧啶二联治疗。在 影响脑膜炎转归、疗程延长的原因。其次，40例cD4 泰国，一项64例患者参加的试验显示：两性霉素B细胞(57±56)爪／一，提示隐球菌性脑膜炎发病与免 和氟胞嘧啶联合治疗极为有效。但鉴于氟胞嘧啶的 疫功能低下密切相关，早期发现艾滋病毒感染并及 毒性作用，国内倾向于采用两性霉素B和氟康唑联 时治疗可能是预防隐球菌性脑膜炎的有效办法。临 合治疗。我们通过对2004--2010年治疗的40例患床医生还应积极探索有效的治疗方法，降低隐球菌 者回顾性分析，治疗药物采用两性霉素B联合氟康 性脑膜炎的病死率。 HCV-HVRl抗体异质性酶联矩阵检测及其 临床初步应用 咯倦水张贺秋王国华 宋晓国 陈坤冯晓燕何竞 朱翠霞严艳惠威李卓 丙型肝炎病毒(HCV)主要经由输血传播，除了特异性的多靶点HVRl抗原组合，通过HCV血清与 少数感染者发展为急性肝炎外，超过70％的患者都 多靶点抗原的反应情况，对HCV患者HVRl抗体的 将慢性化。目前，对慢性HCV的I临床治疗主要是采交叉性进行判断，并进一步评价其在IFN疗效预测 中的作用。 用干扰素(IFN)加利巴韦林的联合治疗，研究显示 HCV基因型和病毒载量都能影响HCV．IFN的治疗 材料与方法 效果，是目前国际上通用的IFN预测因子。相比 HCV-2a感染的患者，1b感染者对干扰素应答效果1．菌株质粒HBl01用于质粒的克隆与扩增，由 差，通常采用更大剂量及更长时间的联合治疗。即 本事保存。原核融合表达载体pBVILl，由本室构建 使如此，临床上发现相同的基因型和病毒载量患者 并保存。 对IFN的应答效果并不相同，这意味着凶该存在其 2．主要试剂与仪器：DNA限制性内切酶购自原 他与IFN治疗有关的因素。 DNA聚合酶。购自原平公司；用于配制LB培养基的 HCV整个基因组呈高度变异，其中位于HCV包 膜蛋白E2N端的27个氨基酸变异最大，故命名为胰蛋白胨及酵母提取物购自本院条件处；PCR产物 第一高变区(HVRI)。研究显示HVRI含有HCV重回收试剂盒由华舜生物工程有限公司生产。PCR扩 要的中和性抗原表位，抗HVRI抗体能在体外中和 PCR 增仪为PE公司生产的Gene-AmpSystem2400。 病毒，其早期出现与HCV的自愈密切相关，通过145份临床慢性HCV临床患者血清由北京市卫生局 HVRl抗原的变异逃避形成新的变异株，是造成肝病研究所提供。 HCV持续感染和抗IFN治疗的重要原因，因此产生 3．序列分析：采用自编VB程序建立国内外 HVRl序列数据库，进行同源比较，据此进行分组 广泛的高交叉HVR!抗体，而不是单一HVRl抗体 将对病毒清除及IFN治疗很有帮助。 后j并筛选每组中的HVRl代表序列，即与组内其它 但由于HCV—HVRl的极高的变异性，至今无法序列相似度最高的序列。分别采用大肠杆菌优势密 对HCV患者体内HVRI抗体的异质程度进行检测。码子合成上述代表序列的基因，并进行基因的克隆 本研究在对HVRI序列分析的基础上，筛选具有株表达纯化。分别包被酶联版，检测每条抗原与HCV- 作者单位：100850北京．军事医学科学院基础医学研究所 HVRl阳性血清参考品的反应活性，筛选其中具有IFN治疗效果好的35例，效果差的42例。疗效好的 准毒株特异性的HVRl抗原，制备芯片，建立HCV 变异的血清学检测体系。用Cy3荧光二抗显色法 检测并统计每份HCV感染者血清与多靶点HVRl差异有统计学意义(t=3．6281，P0．01)。为了进