内皮源性toll-like+receptor+4在内毒素you导急性肺损伤中的作用.pdfVIP

I卜I-ke 4在内毒素诱导急性 内皮源性to receptor 肺损伤中的作用 张进祥王慧 仲照东 李毅清 梁慧芳 吴河水 田元冯玮 郑启昌 急性肺损伤(acutelunginjury，ALI)的本质是肺组织过度的炎症链式反应…，中性粒细 实toll—likereceptor 的ALI[41。因为髓系的PMN与菲髓内皮细胞之间的相互作用是ALI发生发展的关键步骤，为了进 嵌合体小鼠。对照组亦进行骨髓移植，形成“内皮细胞TLR4“+髓系细胞TLR4叫”及“内皮细胞 TLR4“佃‘髓系细胞TLR4“佃¨’纯合体小鼠，然后复制LPS攻击致ALI模型，在体研究髓系或内 皮细胞表面TLR4介入ALI的机制。 1材料与方法 1．1动物模型模型的制作 嵌合体动物遵照本课题小组已建立的方法进行制作哺1。C3H／HeJ品系小鼠(TLR4“佃‘)购于 上海斯莱克实验动物有限公司，C3H／HeN品系小鼠(TLR4√+)购于北京维通利华实验动物有限 公司，移植前后均置于层流环境饲养，垫料、食物、饮水均经过高压消毒，饮水中加入庆大霉素 (320 rag／L)。无菌条件下取出供体小鼠胫骨和股骨，分离骨髓单个核细胞 rag／L)、红霉素(250 mL 射(总剂量：10．0Gy；剂量率1．OGy／rain)后4—6小时尾静脉回输供体小鼠骨髓细胞0．1 鼠骨髓细胞，形成“内皮细胞TLR4√+髓系细胞TLR4叫”对照纯合体(WT／WT：受体／供体)；B： 接受雄性C3H／HeJ骨髓细胞，形成“内皮细胞TLR4“俩‘髓系细胞TLR4“～¨对照纯合体 h后采样。 Siva)，复制ALI模型，5 L 2肺组织损伤程度分析： 1．2．1肺水含量检测，以苯巴比妥(60mg／kg体重)麻醉后活杀小鼠，取右肺称重(Wetweight)， 置80℃烘箱内烘干48 h至恒重(Dryweight)，计算湿重／干重比值(w／D)。肺通透指数测定， m1 在麻醉下进行气管插管，无菌条件下开胸并以2 DMEM培养液灌洗全肺3次，合并肺灌洗液待 检。 1：2．2肺通透指数(LPI)测定：LPI--N$灌洗液中自蛋白／总蛋白比值，反映肺组织血管通透性的 变化。白蛋白用比色法测定，总蛋白用考马斯亮蓝法测定。 1．3肺组织中PMN侵润程度测定 麻醉下取左肺组织100 6．0) mg，置0．5％溴化十六烷基三甲胺(HTAB)磷酸盐缓冲液(pH 277 000 中，反复冻融并匀浆，然后60。C水浴2h，4 g离心12min，取上清进行髓过氧化物酶 nm处读数， (myeloperoxidase，MPO)检测。采用每mg肺组织酶活性单位(u／mg)表示，460 1个酶单位表示Imin内使吸光度(OD值)增高l的酶量。 1．4肺组织匀浆中细胞因子测定 1500 r／min离 麻醉下取左肺组织100mg，加入lmL冰PBS溶液，玻璃匀浆器匀浆后，4C 心10 beta min，留取上清液，备检细胞冈子浓度。肿瘤坏死冈子一a(TNF—Q)及向细胞介素一1 (IL-1 盒说明j眵进行。 1．5肺组织ICAM．1水平测定