腺病毒介导的RNA干扰降低VEGF受体FLT-1，KDR转录抑制血管形成.pdfVIP

第 37卷第 4期 南京师大学报 (自然科学版) Vo1．37No．4 2014年 l2月 JOURNALOFNANJINGNORMALUNIVERSITY(NaturalScienceEdition) Dec，2014 腺病毒介导的RNA干扰降低 VEGF受体 FLT．1 KDR转录抑制血管形成 许剑锋 ，沈维干 ，彭琬昕 (1．江苏省血液中心，江苏 南京210042) (2．南京师范大学生命科学学院，江苏 南京210023) [摘要] 本研究用细菌内同源重组的方法构建了针对VEGF受体 FI一1，KDR的siRNA表达重组腺病毒AdH1． siRNA／FLT一1和AdH1一siRNA／KDR，感染HUVEC细胞，观察两种病毒对 HUVEC细胞体外增殖和形成微血管的 干扰作用．通过 RT—PCR实验表明，AdHI—siRNA／FLT一1和AdH1-siRNA／KDR均可特异性地下调血管内皮细胞 (HUVEC)中的FLT—lmRNA和 KDRmRNA水平．与对照组相 比，FLT-1的mRNA水平下降为40％，KDR的 m ． RNA水平下降为 52％．AdH1-siRNA／FLT一1和AdH1一siRNA／KDR对 HUVEC细胞增殖均有干扰作用，加入病毒 9d后，对照组 的细胞平均计数为 31．5X10／txL，AdH1一siRNA／FLT一1干扰病毒对照组 为 28×10 ／L，AdH1． siRNA／KDR干扰组为21．5×10／ ．AdH1-siRNA／FLT-1和AdH1一siRNA／KDR对HUVEC细胞在Matrigel上形成 微血管均有干扰作用，对照组每HPF形成微血管数量为 10．75条，AdH1一siRNA／FLT一1干扰病毒对照组为 10．25 条 ，实验组AdH1一siRNA／KDR每HPF形成微血管数量为7条．证明AdH1-siRNA／FLT．1。AdH1．siRNA／KDR均可 干扰血管形成． [关键词] 血管生成，血管内皮生长因子受体，RNA干扰 [中图分类号]Q291 [文献标志码]A [文章编号]1001～4616(2014)04—0089—05 Knockdown OfFLT-1．KDR byAdenovirus．Delivered Small InterferingRNA InhibitsAngiogenesis XuJianfeng ，ShengWeigan ，PengWanxin (1．JiangsuProvinceBloodCenter，Nanjing210042，China) (2．SchoolofLifeSciences，NanjingNormalUniversity，Nanjing210023，China) Abstract：ThisstudyusedthehomologousrecombinationtechniqueconstructedarecombinantadenovirusAdH1．siRNA／ FL1、·1andAdHI—siRNA／KDRtargetingFU、-1andKDRinfectshumanendothelialeeHs(HUVEC)，observationthe effectoftheadenovirusinterferetheproliferationofHUVECinvitroandthetubeformation．Reversetranscription—PCR showedthatthisadenoviruscouldspecificallydecreaseleveloftheFLT．1andKDRmRNA ofHUVEC．Compraedw