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羟基磷灰石纳米粒子对肝癌增殖活性的影响木 尹美珍1，一，李世普2，韩颖超2 摘要：为了研究也心纳米粒子对肝癌细胞的增殖能 2．3 m心纳米粒子的制备与检测 力及生物学行为的影响，采用均匀沉淀法制备了均匀分 散的纳米尺度的H．AP纳米粒子．以0．56mmol，L的HAP 过饱和溶液中，连续磁力搅拌，并用超声乳化强化处理 纳米粒子与Bel．7402肝癌细胞作用4d后，细胞行Feulgen 染色和AgNOR染色，显微镜观察标本、图像分析系统 胶。将HJ神溶胶滴在带有碳膜的电镜用铜网上，待载 定量分析肝癌细胞的DNA和AgNOR。结果显示托谨 纳米粒子能降低Bel．7402细胞的DNA含量，减少细胞液挥发后，TEM观察地址纳米粒子的形貌、粒径及分 散度。 一 的AgNoR数量，与对照组比较均有显著性差异(P 0．01)。m心纳米粒子能减弱肝癌细胞的增殖活性，可 将m婶溶胶高压灭菌保存，临用前用RPM【．1“0 培养液稀释成终浓度0．56r珊∞儿。 能是通过抑制DNA的合成，以及减少AgNOR数量而 抑制rRNA的合成，发挥抗癌作用。 2．4 DNA含量测定 关键词： 羟基磷灰石纳米粒子；肝癌细胞；DNA； AgNOR 片的6孔板内，置于含5％C02、37℃培养箱中培养。 中图分类号： R318．08 文献标识码：A 24h细胞贴壁后，随机分为两组。地婶处理组换含m垤 纳米粒子培养液，对照组换新鲜培养液，继续培养4d。 文章编号： lool一973l(2007)增刊一1746—02 取出两组长有细胞的盖玻片，PBS洗3次，C锄oy固 1 引 言 羟基磷灰石(地心)是人体骨组织的重要组成成分， 细胞进行染色，梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶 封片。光学显微镜观察，配套的图文分析系统每组随机 而HAP纳米粒子由于具有独特的性能显示出抗肝癌活 性【l吲。研究表明DNA含量以及核仁组成区嗜银蛋白 (A蝌OR)颗粒数目是细胞增殖活性的重要生物学指标， 软件进行定量分析。实验重复3次。 本实验旨在通过这两个指标从分子生物学角度研究HAP 2．5 AgNOR测定 细胞培养及地心纳米粒子处理细胞同DNA含量测 纳米粒子抗肝癌细胞的增殖活性并探讨其作用机理。 定。取出两组长有细胞的盖玻片，PBS洗3次，甲醇固 2材料与方法 2．1材料 滴于玻片上，室温避光染色20IIlin，去离子水冲洗3～4 Bel．7402人肝癌细胞系购自武汉大学的中国典型 培养物保藏中心。嗍一1640培养基和新生牛血清为 中性树胶封片。光学显微镜观察，配套的图文分析系统 Gibco公司产品，碱性品红和明胶为美国FlukaChenlical 每组随机选取lo个高倍镜(40×)视野采集图像，核仁测 公司产品，亚硫酸钠为上海试剂四厂产品，硝酸银为国 量软件进行定量分析。实验重复3次。 药集团化学试剂有限公司产品。透射电子显微镜(H-600 Sn洲[／EDx 3 结果 PV9100，Jap锄)；光学显微镜及其配套的成 像系统(BX．60Olympus，