鱼类精子冷冻保存研究进展.pdfVIP

2004青岛·全国水产养殖研讨会论文集 鱼类精子冷冻保存研究进展 李军1丁福红2 1 rl-国科学院海洋研究所 青岛 266071 2中国科学院研究生院 北京 100031 摘要：鱼类精了的长期保存对于遗传育种、生物多样性保护、濒危物种保护、渔业可持续发展具有重要 意义，引起了人们越来越』“泛的关注和重视。低温生物学的不断研究和发展为精予的长期稳定保存提供了理 论和技术方面的支持。近年来鱼类精子的冷冻保存在保存原理和技术方面都取得了极大的成就，实现了多种 鱼类精予冷冻保存的技术突破，并对冷冻保存的原理、冷冻损伤机制等方面有了更深刻的认识，在冷冻精予 的生产应用方面也越来越趋于成熟稳定。本文仅针对鱼类精予冷冻保存的研究现状及发展前景作以阐述，以 期对更加深入广泛的研究．J：：：作有所帮助。 关键词：鱼类精予冷冻保存冷冻损伤 1冷冻保存的目的意义 鱼类种质资源是优良品种培育、养殖生产及水产养殖ik町持续发展的重要物质基础。我国是水产人国， 水生种质资源f‘分丰富，海、淡水鱼类总数达3000多种，如何保护、研究和利用好这些种质资源，不仅对 渔业生产有商接的影响，而且是关系到水产业能否持续稳定健康发展的根本。工业的发展产生了大量的废水、 废气，破坏了生态环境，造成了全球气候环境的恶化，同时由于过度捕捞及管理不善，致使水生生物资源口 趋衰竭，许多生物种群濒临灭绝。长期以来，埘鱼类种质保护及品种选育：j：作的忽视，导致养殖鱼类近亲交 配越来越严重，并由此造成种质退化，遗传多样性减少，生长速度减缓，品质下降，对病害希1环境胁迫的抵 抗能力降低，病害发生口趋，E重。冈此，研究保护和利用好现有的水产种质资源，建立健全我国水产种质资 源保护体系无疑是我国21世纪渔业科技发展的重点之一。 低温生物技术是从六十年代开始逐渐发展和形成的一门新技术，对植物的种子、动物的生殖细胞、新鲜 的血液和人体的某些组织经过低温处理后都可以长期保存。该技术作为一项新兴技术不仅促进了生物学和医 学等基础学科的发展，忙寸时为农业、畜牧业、水产养殖业、医药[业及食品工业等带来了巨大的效益。鱼类 精了冷冻保存在鱼类养殖、遗传育种及种质资源保护中的作用主要表现在以下几个方面：第一，建立冷冻精 了库将重要的养殖鱼类莆I濒危鱼类的种质长期保存起来，从而避免由于：捕捞过度、生态环境破坏或环境污染 而造成的鱼类物种灭绝或冈长期养殖、近源交配而造成的种质退化或遗传变异现象。第二，精予冷冻保存研 究可以使不同物种问的杂交、异源雌核发育等实验变得更容易；并解决了雌、雄鱼成熟不同步的问题。可以 为雄鱼严重不足的情况提供精液，直接应用于实际生产；在繁殖盛期，把过量的精子保存起来可以避免精液 的人最浪费。第三，精了冷冻保存可为鱼类生物技术研究不问断地提供材料，火大方便了实验操作。 2低温保存原理及损伤机制 低温生物学是研究在低温(一般0’-196℃)条件下生物的形态结构、生理生化等生命现象的变化规律， 以及对细胞，组织、器官乃至整个生物体活性保存的一门新兴的边缘学科。通过低温抑制细胞代谢，使具有 生物活性的物质暂时失去活力从而达到长期保存的目的。 ． 2004青岛·全国水产养殖研讨会论文集 随着对低温保存过程的不断研究，对冷冻损伤的认识也不断深入具体。细胞内部降温冻结产生冰品是低 温保存的关键损伤因素(丁福红，2003)。在抗冻剂方法的研究中，使用的抗冻剂多为强渗透性的低分-了化 合物，通过抗冻剂的渗入产生渗透压的变化，使得细胞脱水从而抑制冰晶的形成。降温的过程是一个抗冻剂 渗入、细胞内水分脱出的过程，避免冰晶损伤要求尽量慢速降温使得脱水充分，但是脱水过量势必引起细胞 内电解质浓度的升高，引发渗透压、化学键问的作用力等方面的变化，同时细胞失水发生萎缩，体积变小， 当达到最小临界体积时细胞膜会破裂。但如果降温过快，抗冻剂可能渗入量不足，起不到抑制冰晶形成的作 用。 在生物细胞冷却冻结过程中会经历一个过冷状态，即温度一般先降到细胞和培养液的冰点以下，然后才 发生冻结。在大多数情况下，细胞的过冷程度比周围溶液更深。该状态时细胞膜上的脂类物质会从液态转变 为固态，同时细胞膜的不等收缩会导致机械性的膜破裂及膜表面结构的改变，从而导致细胞损伤。采用植冰 的手段在达到冰