金鱼淀粉酶性质的初步研究.pdfVIP

第 26卷第 6期 泉州师范学院学报(自然科学) Vo1．26No．6 2008年 11月 JournalofQuanzhouNormalUniversity(NaturalScience) NOV．2008 金鱼淀粉酶性质的初步研究 谢进金，蔡炳炎，李实攀 (泉州师范学院 生物化学与分子生物学研究所 ，福建 泉州 362000) 摘 要：以金鱼肠及肝胰脏为材料，匀浆抽提离心得粗酶液并对酶性质做初步研究．结果表明：肠淀粉酶与 肝胰脏淀粉酶催化淀粉水解的最适 pH值分别是 6．8，6．2；最适底物浓度分别是 0．02 ，0．03 I最适温度分 别是 35℃，3O℃．并进一步研究一、二价金属离子和重金屑离子对该鱼淀粉酶活力的影响，结果显示。一价金 属离子K 、Na对酶活力没有影响l二价金属离子 Mg2、Ba抖对酶活力具有抑制作用 ，但 Ca。十对酶活力具有 促进作用l重金属离子Hg2、Cd2有明显的抑制作用． 关键词 ：金鱼；淀粉酶I酶性质 ；酶活力I金属离子 中图分类号：Q356．1 文献标识码 ：A 文章编号：1009—8224(2008)06--0081--05 淀粉酶是常见的水解酶之一，是水解淀粉和糖原的酶类的总称 ，参与生物体内的糖代谢活动．金属离子是 影响酶活性的重要因素，不同金属离子对酶活力的影响不同，对酶的结构和功能所起的作用也不相同．通过金 属离子修饰，可以了解各种金属离子在酶催化过程中的作用，有利于阐明酶的催化作用机制，并有可能提高酶 活力，增加酶的稳定性．鱼类淀粉酶的研究，国内外有不少的报道，比如谢进金等分别对尼罗罗非鱼、草鱼、鲤、 鲢、鳙及热带鱼的淀粉酶的活性进行了研究口 ]，吴众望等比较研究了金属离子对缢蛏、文昌鱼、菜青虫、日本 对虾等不同酶活力的影响 ]． 本研究以金鱼为材料，探讨淀粉酶的基本性质并研究部分金属离子对其淀粉酶活力的影响，以期为研制 鱼类人工饲料和深入研究金属离子的消化生理提供科学依据，并希望能对水体污染的生物检测提供相关的参 考依据． 1 材料和方法 1．1 仪器及药 品 3K-30Sigmal高速冷冻离心机 (Beckman)、电热恒温水浴锅(SSY型)、分光光度计 (VIS-7220)等．药品均 为上海化学试剂有限公司分析纯产品． 1．2 粗酶液 的制备 金鱼 (Carassiusauratus)采 自泉州渔业有限公司，鱼大小、体重较均匀．方法详见文[1]．取肠，按 1O mL／g样品比例加入预冷的蒸馏水，匀浆 10,~20rain，在O～4℃下低速冷冻离心机，5000r／min离心30rain， 取上清液作为粗酶液，低温备用． 1．3 酶活力的测定 ： 1．3．1 酶蛋白含量测定 参照李建武等的考马斯亮蓝法测定标准曲线方法口． 1．3．2 淀粉酶活力的测定 参照史永昶的方法[1”：取pH为6．8磷酸缓冲液配成的0．04％的可溶性淀粉溶 液5mL，在 35℃水浴中预热 10rain，然后加适当稀释的酶液 0．5ml，反应 5rain后 ，用 5mL0．1mol／L H。SO,终止反应．取0．5ml反应液与5mL碘液显色，在620nm处测吸光值．以0．5mL水代替0．5mL反应 液为空白，以不加酶液 (加相同体积的缓冲液)的管为对照．酶活力根据下式计算： 收稿 日期：2008一O6—27 作者简介：谢进金 (1965一 )，男，福建安溪人，教授，硕导，从事动物的生理生化研究．E-mail：xiejinjin~qztc．edu．cn 基金项 目：福建省教育厅资助项 目(JAO7153) 82 泉州师范学院学报 (自然科学) 2008年 11月 ~ (U／mL) · 式中，尺0、R分别表示对照和反应液的吸光值，D为酶的稀释倍数．确定在 pH为 6．8磷酸缓冲液下，35℃ 5rain内水解 1mg淀粉的酶量为一个活力单位． 1．3．3 淀粉酶最适pH测定 方法同上，在不同pH的缓冲液介质中测定淀粉酶活力． 1．3．4 淀粉酶最适底物浓度