诱导分化、化疗和免疫治疗在荷人脑胶质瘤动物体内序贯组合研究.pdfVIP

194 中目癌症研究进晨@ 诱导分化、化疗和免疫治疗在荷人脑 胶质瘤动物体内序贯组合研究 黄强施铭岗董军李伟生孙志方 诱导分化治疗是肿瘤学界的热门话题之一，在白血病方面已经取得了十分可喜的成绩，丽 对于实体瘤，仍以体外研究为主，我们曾用HMBA(hexamethylene 究“。-，所证实的诱导分化效应未能在荷瘤动物体内得到预想的结果，可能是受其毒性作用的 限制在体内达不到促进瘤细胞分化的有效浓度，而苯丁酸钠(sodium phmylbl·竹眦，SPB)相对无 毒，在体外诱导分化效应得到确认的基础上(另文报告)，本文报告SPB与化疗和免疫治疗组 合在荷低分化人脑胶质瘤动物体内诱导分化治疗结果，并对其作用机制进行探讨。 材料与方法 (一)低分化细胞株SHG一44—9的克隆 在相差显微镜下用自制的毛细吸管对着传代中刚贴壁的SHG一44单个细胞，吸出后与滋 养细胞共培养，从获得的25个单细胞起源的克隆中，取分化程度最低的第9号细胞扩增后备 ’ 用。 (--)荷瘤动物模型的建立 1 实验动物为本室自行繁育在生物净化室(NaM000级，半屏障)、按SPF级要求管理的NC 裸小鼠(单纯T细胞缺乏)和SCID小鼠(T、B细胞联合缺乏)，鼠龄6—8周，体重22g左右，两 性兼用。将上述的SHG一44—9细胞，以1×107／只接种于实验鼠的右腋皮下，致瘤后取瘤组织 继续传代，约3—4代后移植瘤的生物学特征稳定(致瘤率100％，生长速率的个体差异很小)， 肿瘤长至0．5咖’左右时开始实验治疗。 【三)治疗方案设计 100ms／kg，每日一次(qd)，第3批的剂量为300 SCID鼠体内作联合免疫治疗。 (2)与BCNU(卡氮芥)联用，先用BCNU 用SPB。 6 (3)与CDDP(顺铂)联用，先用CDDP 批。 作者单位：215004苏州，苏州大学附属第二医院神经外科 诱导分化、化疗和免疫治疗在荷人麓胶质瘤动物体内序黄料合研究 195 建立的人鼠淋巴免疫嵌合模型所用的方法㈨，在实验结束前2周将PBMC经腹腔转输给荷 SHC,44—9实体瘤的SCID鼠，每周1次共2周。 结 果 l一)肿瘤生长速度观察 从实验当天开始每周2次称鼠体重和测肿瘤短径(a)和长径(b)，根据公式计算肿瘤体积 w=a2×b／2，根据各时间点的肿瘤大小绘制生长曲线。 (二)组织病理学光镜观察 取不同组织，常规石蜡包埋切片，HE染色，光镜观察细胞形态，结果表明，对照组肿瘤细胞 异形明显，密集分布，间质成分少，侵袭性强，经SPB处理后细胞异形性降低，间质增多，此种 变化联合BCNU和PBMC后更加明显。 (三)细胞增殖动力学变化 采用流式细胞术，对移植瘤组织细胞增殖进行检测。 。 (四)胶质瘤纤维酸性蛋白(GlⅪ·)表达 (五)主要组织相窖性复合物(MaC)一1表达 采用流式细胞术对移植瘤组织的MHC—1分子表达进行检测，结果表明，治疗后的 MHC一1表达增加，以联合治疗组最明显。 I六)癌基因c—myc蛋白表达 采用Western 降，以联合治疗最明显。 (七)细胞凋亡 采用Tunnel法检测移植瘤组织中细胞凋亡情况，凋亡细胞呈棕色，核固缩，核周呈亮区， 结果表明，治疗组中BCNU--SPB+PBMC组中凋亡细胞易见。 讨 论 l一)苯丁酸钠的治疗剂量 代谢所需之能量，而SPB在体内经线粒体氧化，并迅速代谢成苯乙酸(PA)，与血浆中的氨、谷