棉卷叶野螟泛素基因的克隆、序列分析及原核表达.pdfVIP

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2017-08-09 发布于北京
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棉卷叶野螟泛素基因的克隆、序列分析及原核表达.pdf

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昆虫学报 Acta Entomologi ca Sini ca , September200 8,5 1 ( 9) :9 10-915 ISS6 棉卷叶野螟泛素基因的克隆、序列分析及原核表达 1 1,2, 3 1 1 1 张宇宏 ,林　同 ,张　琪 ,常润磊 ,温秀军 ( 11 华南农业大学林学院 ,广州　5 10642 2 1 华南农业大学经济林研究中心 ,广州　5 10642) ( ) 摘要 : 本研究用 RT2PCR方法 ,克隆了棉卷叶野螟 Haritalodes der ogata Fab ricius 泛素基因编码区 ,GenBank登录号为 EU5 8014 5。序列分析表明 ,该编码区长 228bp, 编码 76 个氨基酸 ,推测的编码蛋白的相对分子质量和等电点分别为 8153kD 和 5 183 。同源性比较发现 ,棉卷叶野螟泛素基因与其他 10 种昆虫泛素基因在氨基酸水平上具有 93% 以上 ( ) 的相似性。系统发育树显示棉卷叶野螟与斜纹夜蛾 Spodopt era l itura Fabricius 遗传距离较近 ,通过同源建模获得了该棉卷叶野螟基因编码蛋白的理论三维结构。将棉卷叶野螟泛素基因与 p ET232 a ( + ) 连接 ,构建原核表达载体 pET232a2ub , 经 IPTG诱导 ,棉卷叶野螟泛素基因在大肠杆菌 BL21(DE 3) 中高效表达。本研究成功克隆了棉卷叶野螟泛素基因的编码区 , 并经 West ernblotting 分析证明实现了该基因的原核表达 ,为进一步研究其在该昆虫体内的作用机理奠定了基础。关键词 : 棉卷叶野螟泛素基因克隆基因序列分析原核表达中图分类号 :Q9 66 　　文献标识码 :A 　　文章编号 : 045426296(2 008) 0920 910206 Cloning,sequenceanalysisandpr okar yoticexpr ession ofth eubiqu itingene of Haritalodes der ogata (Fabr icius)(Lep id op ter a :Pyr alidae) 1 1,2, 3 1 1 1 ZHANGYu2Hong ,LIN Tong ,Z HANGQi ,CHANGRun 2Lei ,WEN Xiu 2Jun ( 11 CollegeofForestry, SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou,510642,China 2 1 Resear chCentreofEconomicFor estof SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642,China )