国产高聚物型色谱柱在有机酸分离中应用.pdfVIP

国产高聚物型色谱柱在有机酸分离中的应用 0009) 邵承伟，方硕，魏荣卿，刘晓宁(南京工业大学制药与生命科学学院色谱中心，南京21 彳f机酸J一泛存n：于食品、删草、}IIf物和发酵液巾。f¨，J囱．机酸的分析方法土要有：艘碱滴 定法、薄J，÷色谱法、气棚色谱法、离了色谱法及I：’五效液相色谱法等。酸碱滴定法只能测定总酸 壤，儿操作繁琐：薄层色谱法定鼍精度篾：气才¨色谱法需衍，{!步骤，误差较大：离予色谱法多 采用稀的强酸如稀硫酸和稀{怠酸作为淋洗液，对没备有‘定的腐蚀作用。而t滔效液相色谱法操 作简便、准确度高、。匿现’陀好，町同n0‘定鞋多种有机酸，I大】此已柏：食品、f卣物分析、发酵液等 巾的低分子鼍有机酸的分析检测中得至¨‘泛的应用，其Ifl，反相f：’j效液相色t普(RP．HPLC)足应 用最广泛的液市日色谱法，已J}J十各种彳丁机化合物的分离，杓：食品、医药、生物分析等领域中起 着重要作用。 fH．常用于反相色谱分离的C，。键合订#胶柱存柙：酸碱稳定性差，易污染，雉以清洗再生等缺 点：此外神：反相色谱分离柯机酸时，为了使有机酸尽nJ．能地以分子肜式存柏i，通常使用酸，件流 动相米抑制有机酸的解离，但IiCl。柱pH使用范|{；l较窄，相：pII较低的流动相中稳定·降较差，分 离有机峻宵一定局限一陀。而I：’i聚物型疏水性基质适用的pit值变化范围大(pH=l一14)，神：强(酸 ／碱)离J二溶剂中化学稳定。陆好，月．易消洗再生，适合十宵机酸的分离。本文选用南京麦科菲高 效分离载体有限公司提供的高聚物型有机酸色潜柱(MKF—OrgA)分离瓦种常见有机酸(}fI酸、 L一乳酸、乙酸、琥珀酸和丙酸)，优化了色谱条件，取得r较好的分离效果。 1．流动相中添加有机改性剂对有机酸分离的影响 用反相色谱分离有机酸Ⅱ寸，为了改善峰形，减少峰拖尾，常加入少量的宵机改性剂。本文 考查了甲醇和乙腈这两种有机溶ltx,t有机酸分离的影响。l{】醇作为有机改。陀剂时，／fi能很好的 改善琥珀酸和内酸Rx,．I称凶f，导致这两个样品柱效较低；而添加乙腈改善了乙酸、琥珀酸、 内酸的射称闪予，J己其足后l埘者，峰型和柱效随着乙腈含鞋的升高均育j7明显改善。所以本实 验确定乙睛作为有机改。阽剂。『j{j】n寸比较了乙腈含最分别为1％、2％、3％、4％时有机酸混合物的 分离情沙0，由于乙腈含量为4％0时甲酸和L一乳酸的分离度1．5，没有实现基线分离。所以确定 乙腈的最佳比例为3％。 2．不同磷酸盐缓冲液浓度对有机酸分离的影响 扫：卜述优化的旗础一卜，考奄磷酸：氢铵浓度分别为0．005M、O．01M、O．02M、0．03M时有机 酸混合物的分离情况：1)击拄浓度较低时(O．005M)，乙酸和琥珀峻的拖尾现象较为一E重；2)0．02M 的磷睃盐缓冲液HJ+瓦种样，；^的对称凶予均较好。虽然磷酸盐浓度为0．03M时，琥珀酸t,9／眭-效较 高，但考I,i至l高浓度的盐对泵和柱子的寿命产生的不利影响，所以综合考虑，选择最佳磷酸盐 缓冲液浓度为0．02M。 3．不同pH的磷酸盐缓冲液对有机酸分离的影响 有机酸为弱酸，易发生解离f而不能神：『划定相l二保留。为J，使有机酸尽I，J．能地以分了肜式仃和：， 通常使tffj酸，陀流动棚米抑制有机酸的解离，不旧有机酸的解离、F衡常数不问，解离程度受溶液 pH的影响较大。 柏：，}二述优化的笨础卜．，我们考奄了4iI司pH的磷酸盐缓冲液对有机酸混合物分离的影响：1) ptt分别等于2．7和2．1时，L．乳睃和乙酸的谱峰／fi侧有肩峰卅现，I叮能这两种弱酸n：此pH卜发 生了解离，以两种形式存和：：2)pH等j：2．3 n、J，丙酸不能和乳酸-f，的微小杂质分离；3)pH 等于2．9和2．5刚‘，五种样品峰型尖锐，但pH2．5时的柱效较pIl2．9有明显提{：苦，所以选择磷酸 盐缓冲液的最佳pH为2．5。 4．不同柱长高聚物型反相色谱柱对有机酸分离的影响 i．d．和150×4．6ram 神：卜^述优化的綦础卜^，考食了柱尺、j‘分别为250X4．6mm i．d．的高聚物型 反相色谱柱对有机腹分离的影响。结果见农I：