MTT法测定冬凌草醇提物和水提物的体外肝肾细胞毒性.pdfVIP

MTT法测定冬凌草醇提物及水提物的体外肝肾细胞毒性 李寅超，陈慧芳，孙曼，周甜，吴翠萍，刘宏民4 郑州大学药学院药理学研究室郑州450001 #通讯作者，男，1960年3月生，教授，博士生导师，研究方向：新药研究开发和手性化合物的合 成，E-mail：liuhmOzzu．edu．crl 基金项目：国家科技部“十一五”科技支撑计划予课题(2006BAl06A03—03) 关键词MTT法；HL一7702细胞；HEK-293细胞；冬凌草醇提物；冬凌草水提物；毒性 摘要 目的：用MTT法评价冬凌草醇提物及水提物对HL-7702细胞和HEK一293细胞的毒性。方法：采用MTT法进行研究。 结果：HL一7702细胞分别经柴胡皂苷d、冬凌草醇提物和水提物处理24、48h后，柴胡皂苷d的Ic5。分别为3．42、 1．98II g／mL，冬凌草醇提物的I岛分别为295．167、78．349u g／mE，冬凌草水提物的Ic。分别为4357．310、 2134．194ug／mL。HEK一293细胞分别经马兜铃酸I、冬凌草醇提物和水提物处理24、48h后，测得马兜铃酸I的IC。 为34．708、15．274ug／mL。冬凌草醇提物的Ic50为224．544、106．292ug／mL，冬凌草水提物的IC。。为2252．899、 1153．267ug／mL。结论：冬凌草醇提物和水提物的体外肝肾细胞毒性均不明显。 冬凌草[Rabdosia 区域特色中药，因其抗癌功能出色，对多种肿瘤有效，被誉为“紫杉醇第二”[11，目前已成为国内 外肿瘤学者竞相研究的热点。研究表明，冬凌草的醇提物含有冬凌草甲素、乙素、丙素，胡萝卜苷， enmenol—l 正丁酯、3，4-二羟基苯乳酸、延命素．1p．D．吡喃葡萄糖苷等水溶性成分131。文献记载冬凌草醇提物 及水提物对食管癌、贲门癌、肝癌、乳腺癌有一定疗效f4】a但有关冬凌草醇提物和水提物的体外肝、 比色法考察冬凌草醇提物及水提物的肝、肾细胞毒性，报道如下。 1材料与方法 1．1材料 人肝细胞株HL．7702细胞(中国医学科学院上海细胞库提供)，培养于含15％胎牛血清的 传1代刚。 1．2药物及试剂 供，4C冰箱保存，临用前先用DMSO配制成储备液，再用培养细胞的完全培养基进行稀释。柴胡 acid， 储备液，后用DMEM培养基进行稀释。胎牛血清(杭州四季清生物工程材料有限公司)，RPMI一1640 (生化纯，北京索莱宝科技有限公司)；MTT临用前用PBS配成5rng／mL，其它试剂皆为国产分析 276 纯，实验用水为Mili2Q自制超纯水。 1．3仪器 PowerWave XS2型酶标仪，美国生产。 1．4IITT法测定药物的细胞毒作用 胞的空白孔加入DMEM完全培养基，实验组分别加入不同浓度的柴胡皂苷d、马兜铃酸I、冬凌草 醇提物和水提物，每个浓度设6个平行孔。其中，柴胡皂苷d终浓度为0。l、0。5、1、2、2．5、5、1099／mL； DMSO，震荡器震荡混匀约1min，于 各孔分别加入201tlMTT，温育4h后，弃去培养基，加入1501xl 570nm波长处读板。依据测得的吸光度值计算细胞存活率，进而计算细胞抑制率l刀。 细胞抑制率(％)=(1一试验组吸光度值／对照组吸光度值)×100％ 2结果 将不同浓度的柴胡皂苷d和马兜铃酸I、冬凌草醇提物和水提物与HL．7702细胞、HEK．293细胞 17．0 分别作用24、48h后，用MTT法测得细胞的存活率，进而计算抑制率(见表l、2、3、4)。用SPSS Ixg／mL， 冬凌草水提物对HEK．293细胞作用24、48h的IC50分别为2252。899、l153．2671tg／mL。与柴胡皂苷d 明