真菌感染的诊断和治疗—临床实验室的作用.pdfVIP

真菌感染的诊断与治疗一临床实验室的作用 李若瑜 (北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034) 近年来，我国与世界其它地区相同，在免疫受损宿主如器官移植、肿瘤、自身免疫病、 艾滋病和抗生素使用不当等患者中，条件致病性真菌感染，特别是深部真菌病的发病率和 死亡率呈明显上升趋势，已日益受到医学界的重视。病原菌种类也在不断变化，医学真菌 工作者面临着前所未有的重大机遇和挑战，临床真菌实验室在真菌病的诊断和治疗中发挥 着越来越重要的作用。 1．真菌致病新种的发现及其鉴定 真菌感染在数量和种类上的增加除与易感个体数量的增加有关外，还与临床医师对真 菌病认识的增强有关。近年来，由于I临床各科室对真菌感染倍加重视，对真菌病原体的检 出率不断提高，常见的条件致病性真菌如白念珠菌、烟曲霉、新生隐球菌等引起感染的报 道不断增多，其中包括不少严重的侵袭性或播散性感染。一些国内过去少有报道的真菌感 染也在增加，如毛霉、根霉、根毛霉、镰刀菌、枝顶孢霉的感染等。还有不少国内乃至世 capsulatum)感染，引起国内外关注；阿萨希毛孢子菌 感染和组织胞浆菌(Histoplasma (Trichosporon toruloidea)引起皮肤真菌病的国内 aperspersum)的感染；圆酵母亨德逊霉(Hendersonula 首例报告；棘状外瓶霉(Exophialaspinirera)所致系统性暗色丝孢霉病国内首例报告：此 外还有葡萄孢维郎那霉(Veronaeabotryosa)引起的世界首例感染报告等。存在的问题是对 真菌学检验的经验尚不足，如不能将镜检与培养方法联合应用；过分依赖培养结果(实际 在有菌部位其意义有限)，忽略了直接镜检的阳性发现才是病原真菌入侵机体的直接证据； 不注重寻找组织学证据这一诊断的“金标准”等。在对培养物的鉴定方面，也存在不够规 范的问题，传统的真菌分类鉴定方法主要依赖于其表型特征如：形态学、有性型、营养需 求等特性。在菌种鉴定时，应注意选择标准培养基、合适的培养温度等条件，才能保证观 察到准确的形态学和生理生化特征，为临床诊断提供详尽、确切的病原学资料。 2．真菌感染诊断新方法的应用 真菌感染在数量和种类上的增加，迫切要求对相应的诊断方法进行改进。与其它微生 物感染相同，真菌病的诊断也是基于临床观察和实验室检查两者的结合。由于致病真菌的 变异性和复杂性，仅靠传统方法往往不能达到对其快速、准确诊断目的。目前在国内，真 菌病的诊断除采用常规的真菌学镜检和培养方法外．还应用了以下辅助手段 (1)．组织病理学检查 组织病理学检查对于深部真菌病的诊断尤为重要，其结果与真菌学检查相结合可作为 诊断的重要依据。简言之，如果在待检组织中发现了真菌病原体及与之相应的组织反应， 即可确诊真菌感染。对于一些难以培养出致病菌的疾病，或者由于种种原因忽略了真菌感 染的可能而未做真菌学检查，组织病理学证据是最为可靠的诊断依据。同时，这一检查还 可以帮助了解致病菌在组织中的寄生形态特点，了解病原体与宿主之间的相互作用。由于 常规HE染色标本中大部分真菌着色不良，故特殊染色法对检出真菌病原体十分重要。常用 的真菌病原体染色方法包括：过碘酸锡夫氏染色法(PAS)；嗜银染色(GMS)；粘蛋白卡 红染色(MMS)等几种方法。此外，免疫荧光和免疫组化方法可进一步对组织切片中的真 菌成分做出特异诊断。目前对于曲霉病、念珠菌病和毛霉病已有相应的特异抗体用于免疫 组化诊断，国内『临床亦有应用，对于感染病原体的确定起到了有力地帮助作用。 (2)．血清学检查法 血清学技术已越来越普遍地应用于深部真菌病的诊断。其方法包括检测抗体和检测抗 原两类，以抗原检测应用更为广泛，因其特别适用于免疫低下宿主真菌感染的检测，目前 常用的试验有检测新生隐球菌荚膜抗原的乳胶凝集试验、ELISA试验；检测念珠菌和曲霉 抗原的ELIsA试验，ABA--ELISA试验以及检测双相真菌的外抗原试验等。这些检查方法 为临床上致病菌的快速诊断提供了方便。目前已制备出针对人类主要病原真菌结构的单克 隆抗体，其诞生已给真菌感染的诊断带来了明显的进步：改进了对免疫低下病人体内循环 抗原的检测。单克隆为基础的血清学试验也已上市用于深部真菌病念珠菌病、曲霉菌病和 隐球菌病的诊断，但目前在国内尚未普遍应用这些