实验二植物组织中可溶性糖的薄层层析分离与鉴定.docVIP

实验二[实验目的] [实验原理] [器材与试剂] 硅胶254薄层层析板展开剂（） [实验步骤] 硅胶板活化将硅胶板置于120℃烘干箱中，烘干30min。点样量约20－30μL，分次滴加，使点扩散后的直径不超过3ｍｍ。 4、展层 将点样后的薄层板置于密闭的薄层层析缸中，用新配制的展开剂，采用上行法展层，至展开剂距薄层板的上端约１cm时取出，用吹风机吹干。 5、显色 采用苯胺－二苯胺－磷酸（2g二苯胺，加2mL苯胺，10mL 85%磷酸，1mL浓盐酸，100mL丙酮，溶解后混匀）显色剂丙酮溶液喷雾法显色，然后于85℃烘箱中烘30分钟，[实验结果] 精确量出原点至溶剂前沿，以及各斑点中心的距离，计算出它们的Rf值。根据标准糖的颜色和Rf值，鉴定出样品中糖的种类，并绘出层析图谱。 原点至斑点中心的距离 Ｒf＝──────────────。 原点至展开剂前沿的距离 [注意事项] 1、点样时，要注意点样点不能太大，操作时，应待第一次点样风干后，再在原点样点上继续点样，为少量多次点样。 2、每个点样点不宜距离太近，点样点不宜靠近硅胶板边缘，注意边缘效应。 3、放置硅胶板时，不能碰着层析缸的内壁。在用多元系统进行展层时，其中极性较弱的和沸点较低的溶剂（例如氯仿-甲醇系统中的氯仿）在薄层板的两边易挥发，因此，它们在薄层两边的浓度比在中部的浓度小，也就是说在薄层的两边比中部含有更多的极性较大或沸点较高的溶剂，于是位于薄层两边的Rf 值要比中间的高，即所谓“边缘效应”。为减轻或消除边缘效应，可层析缸，使层析缸内溶剂蒸汽的饱和程度增加。 1