肿瘤蛋白质组学地研究进展.pdfVIP

I专题讲座专题报告 肿瘤蛋白质组学的研究进展 肖志强 中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室 湖南长沙410008 摘要：蛋白质组学作为后基因组时代研究的一个重要内容，已广泛深人到生命科学和 医药学的各个领域，其理论和技术的发展完善为肿瘤的研究带来了新的思维方式和研究 领域，它不仅可以从组织或细胞蛋白质整体水平这一全新角度来研究肿瘤发病机理，而 且能寻找用于肿瘤诊断和防治的生物标志物。 关键词：肿瘤；蛋白质组；蛋白质组学；研究进展 基金项目：国家“973”计划(NO 函[2002148)；湖南省科技厅重点科研项目(NO02SSY2001—1)；湖南省卫生厅重点科研 项目(NOZ02．04) 人类基因组序列图谱的公布，在揭示基因组的精细结构的同时．也凸现出基因数量 有限性和基因结构的相对稳定性，这与生命现象的复杂性和多变性之间存在着巨大反 差。这种反差促使人们认识到：基因只是遗传信息的载体。要研究生命现象，阐释生命 活动的规律，只了解基因组的结构是远远不够的，这也使得人们对于生命活动的直接执 行者——蛋白质的重要性有了更深刻的理解，因此，对蛋白质的数量、结构、性质、相 互关系和生物学功能进行全面和深入的研究，成为生命科学研究的迫切需要和重要新任 务。—个以“蛋白质组”为研究重点的生命科学新时代已悄然到来。本文就蛋白质组学 基本概念、研究技术和肿瘤蛋白质组学研究进展作一综述。 1．蛋白质组和蛋白质组学的概念 a 合，意思是proteinsexpressedby genome，即为基因组表达的蛋白质”．2】。广义上讲， 蛋白质组(proteome)是指“一个细胞或一个组织基因组所表达的全部蛋白质”。它是对 应于一个基因组的所有蛋白质构成的整体，而不是局限于一个或几个蛋白质。 由于同 一基因组在不同细胞、不同组织中的蛋白质表达情况各不相同，即使是同一细胞，在不 同的发育阶段、不同的生理条件甚至不同的环境影响下，其蛋白质的存在状态也不尽相 同。因此，蛋白质组是一个在空间和时间上动态变化着的接体。蛋白质组学(proteomies) 是指以蛋白质组为研究对象，从整体的角度，分析细胞内动态变化的蛋白质组成与活动 规律m】。 ， 2．蛋白质组研究的主要技术 蛋白质组学研究主要涉及有两方面的内容：一是研究蛋白质组的组成成分，即表达 蛋白质组学；二是研究蛋白质组的功能，即功能蛋白质组学。蛋白质组研究的支撑技术 主要有双向凝胶电泳技术和以质谱为代表的蛋白质鉴定技术，以及生物信息学技术。 2．1双向凝胶电泳技术 双向凝胶电泳技术(Two·dimensional gel O’Farrell等”1创立，其原理是在相互垂直的两个方向上，分别基于蛋白质不同的等电点 和分子量，运用等电聚焦电泳(isoelectric focusing，IEF)和SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS—PAGE)把复杂的蛋白质成分分离。该技术主要用于分离细胞或组织蛋白质抽提 物，构建特定组织或细胞蛋白质的“二维电泳图谱”，分析特定条件下蛋白质的表达状 况，进行蛋白质组差异比较。完整的双向凝胶电泳技术包括样品制备、等电聚焦、平衡 转移、SDS、斑点染色、图像捕获和图谱分析等步骤。随着样品制备方案的完善、 固相pH梯度(Immobilized pHgradient，IPG)双向凝胶电泳的应用、染色方法的改进和 图像分析软件性能的提高，2-DE技术凭借其高通量、高灵敏度、高分辨率和重复性好， 便于计算机进行图象分析处理、可以很好地与质谱分析等鉴定方法匹配的优点，已成为 蛋白质组研究中最常用的蛋白质分离技术。除2-DE技术外，用于蛋白质组分离技术还 有亲和层析、毛细管等电聚焦、毛细管区带电泳和反向高效液相色谱等。 2．2质谱技术 对2-DE等技术分离的蛋白质进行鉴定是蛋白质组研究的重要内容，质谱鉴定技术 (mass spectrometry,MS)的引入是蛋白质组学发展中最重要的技术突破，它具有高通 量、灵敏、准确、自动化等特点，已逐步取代传统的Edman降解测序和氨基酸组成分 析，成为蛋白质鉴定的核心技术卜“