猪原始生殖嵴细胞(PGCs)建系因素影响的研究.pdfVIP

畜牧部分 155 猪原始生殖嵴细胞(PGCs)建系因素影响研究。 冯书堂“，董晓，刘立新，牟玉莲，况玲，陈红平，张莉，张勇，张青峰 中国农业科学院畜牧研究所，北京，100094 至4代、2个传至3代冻存。并进行了AKP染色、体外分化、冷冻一解冻复苏和嵌舍体制作等鉴定研究。研究发现：不 同胚龄对EG细胞建系具有一定影响，不同培养液对EG细胞建系效果不同，STO细胞饲养层的质量是建抹、传代、冷 冻一解冻复苏的关键因素之一。EG细胞系的初步建立，为今后筛选进入种系的EG细胞系、实施体外基因操作提供了 可能。 关键词：嵌合体；囊胚；近交系猪；原始生殖嵴细胞 前言 stem stem cells，ES)和胚胎原始生 多能胚胎干细胞(pluripotentcells)包括胚胎干细胞(embryonic ceils，EG)。ES细胞由囊胚内细胞团(innercellmass，ICM)分离获得，而EG 殖嵴细胞(embryonicgerm 细胞从原生殖嵴细胞(Drimordial germ 等)，但均具有“正常的核型、多功能性或全功能性、高度分化潜能性、定向整合能力，以及体外无限增殖 能力”的特性。多能胚胎干细胞是动物克隆廉价材料、转基因的高效载体，是种质资源保存、实现体外 基因操作重要途径之一。因此，胚胎EG细胞同ES细胞一样均具有重要的理论研究意义和潜在的应 用价值。 由于猪器官的大小、生理解剖学、生理生化指标和代谢免疫系统与人类相同或近似，猪是人类理想 的动物模型和“替难者”、异种器官移植的供体，并具有繁殖周期短、价格便宜、大量获取、不易传播人源 性的某些疾病，如肝炎、AIDS等优点。因此，猪建系较之其他动物具有更广阔的开发利用前景。此外， 由于一个猪早期胎儿可提15000多个PGCs，较之一个囊胚期的胚胎可分离获得更多的内细胞团细 干细胞研究开展较晚，但已有建系报导、中国科学院上海细胞生化所和中国农业科学院畜牧研究所已 得到了PGCs多能干细胞嵌合体猪(2003)。 *本研究出国家自然科学基金委97重大项目“异种器官移植慕础性研究”项融资助(No。 ”作者简介：冯书堂，男，汉族，河北大名县人，1945年9月生，研究员、博士生导师。研究方向：动物细胞工程与近交系实验动物培 M 育o ail：fst508@21cn．Iroilao 156 2005学术年会 由于小型猪近交系较普通猪投资少、设施小、价格更底廉；近交系较普通猪更易于SPF培育，不必 年年导血；基因高度纯合，有些基因位点上等位基因仅有1～2个，便于体外遗传操作，被改造基因可有 效表达和稳定地传代。所以本研究以近交猪小型猪为材料开展胚胎原始生殖嵴细胞建系的研究，将为 我国尽快建立小型猪近交系PGCs多能干细胞系提供技术依据，因此，本研究具有较大的优势和研究 意义。 1 材料 1．1 材料 实验动物为WZSP近交系(中国农业科学院畜牧研究所五指山猪保种场提供)、工作环境为GLP ，解剖显微镜、倒置显微镜为Nikon产品等。 标准实验室。注射仪为Eppendorff产： 1．2主要试剂 mareserum 孕马血清促性腺激素(pregnant chorionic 司)；人绒毛膜促性腺激素(human buffered ma)；杜氏磷酸盐缓冲液(Dulbecco’phosphate Gibco BRL) 化液(Sigma)；lO／．tg／ml丝裂酶素c液(m