用荧光显微与蛋白质组学技术分析水稻叶片受病原菌侵染后的次生代谢变化.pdfVIP

用荧光显微和蛋白质组学技术 分析水稻叶片受病原菌侵染后的次生代谢变化。 陈芳育1，黄青云2，杨晓坡2，张红一心2，陈亮2 1．生物农药与化学生物学教育部重点实验室(福建农林大学)， 福建农林大学作物科学学院，福州，350002I 2．细您生物学与肿瘤工程教育部重点实验室(厦门大学)， 厦门大学生命科学学院，厦门，361005) 摘要奉研究远用荧光昱徽蔹书分析了高抗术稻品种。佳辐占”受钿务病痛原茼经袭后 的叶片组织照微结构变化，发现叶片撕胞璧发生次生加犀和次生代谢物在痛斑区域产生特异 性累积，这些雯化主要建由于本质素、酚类物质争植保素警的诱导幔增多引起的。蛋白质组学 谢的蛋白在细条旃病原蘸侵染期袭啦了增强表达，这提示拳稻增强了未质素、植保素和酚粪物 质等的生特合成，从而促进了叶内细胞壁鳃加厚争抗篷诈用的增强．这个研究黠暴与焚光显 微分据的鲒暴相符，表明这两种方法馋相互结合可应甩于植物抗病的瑰生代谢研究。 关键词水稻病原茵 夔先显微技术蛋白质蛆学 leaf 水稻细菌性条斑病(BacleriaI 染引起豹编蔼性病客，简称“绑条病”，广泛分稚在亚洲的热带，亚热带稻作区。水攒发病后一般娥产 对细条病的抗性机理买有十分熏要豹理论和现实意义。。植物一瘸原物”的互作桃翻鞠途径十分复杂， 在病原授染避礁中。植物通过各稚擞生代谢途径在体内形成各种蜷抵抗病原物有关的防正反应次生物 质。这些次生代谢的产物是其抗病物质慕硝。本试验运用荧光显微技术和蛋白质组学技术同时分析水 稻叶片受细条病病原萄经絷后舸次生代谢变化，旨在从鼎微结构水平和蛋自质组水平上同时获得对病 理发生和细胞次生代谢簿过程的整体认识，并为研究植物对其他病害的抗瘸次生代谢提供参考． 一、材料与方法 (一)供试材料 供试水稻材料为惠抗细条病的优质高产品种——“佳辕占”；供试病源荫为南方稻聪细条癍强拳力 菌辕——889773～1一l”． (二)拳稻叶片接茼处理 o 基金项譬。生物农药与化学生物学教育部重点实验宣(福建农林大学)开放课题基金项目(K期411)资助。 ·54· 理维． (三)水稻叶片组织的荧光显微观察 馏水中带酆变骏室．以用于荧光墓微观察。叶片徒手横切片，用番红·苯胺蘸对毅，其程序为t切片放 t 5min#移入1 蘸色激发光源和紫外激发光源进行观察，选用40f爵物镜镜检，200愦目镜压片观察，并摄像。 (四)叶片蛋白质双向电泳 位)的Ⅱ}片，每次从6株植株驭重复攥品，混合．避遮殿于澈氮中冷冻蘩用，嗣时取处理组和砖照组．参 法㈨进行溯定，每根管状胶上样挞约为总蛋白100弘g。双向电泳参照何瑙锋等的方法‘”进行．银染参 照Pharmacia公司的蛋囱质镦染试验盘的操作手册介绍的方法嗍进行。 (五)差异蛋白质点的确定及MALDI—TOF质谱分析鉴定 测定获得肽指纹图谱(PMF)。用MASCoT软件搜索MSDB数据库． =、结果与分柝 (一)叶片横切游的荧光显微病理观察 染色后能在蓝必激发下诱发搬黄色荧光所致．橙黄色荧光屁示出了细胞壁的增厚和叶脉维管柬细胞闭 产生了部分填充．在隧1一c可以观察羁在紫外激发光下出天蓝色荧光所显示的相同艘槊。由髑TR— b和TR—c可见．在鞭种激发光源下．染病叶片组织中都可以观察到明显的特异性红色荧光物质，且在 是叶片细胞与痰琢筒氯俘过程中所特笄性累积的酚类物质和植傈素等次生代谢物．这表明在细条病病 原蔺侵染后，水稻叶片细胞内禽物质发生了变化，从而导致了细胞学和形态学上的变化t而这种变化在 病斑发生区域更加明鼗。 ·55+ 隧l水稻耐。片接菌5d后缀织端构的荧光监散病理观察瞧片 《注t横蜘片‘×2∞目饿}CK为健康叶片切片，TR为囊病叶片蜘片lt山，c分刚为阿一视野庄白色光爨，蓝搬漱发光薛和繁外 激蹙光豫下的隔像．) (二)次生戎谢相关蛋白质的差异表迭 参与次生代谢(另外宥28个蛋自分别参与了信号转譬、防卫、糖代谢及蛋匀质会成