高活性谷氨酰胺酶豆豉芽孢杆菌的筛选及glsA基因的克隆.pdfVIP

贵卅f农业科学 2011，39(6)：119～122 GuizhouAgriculturalSciences [文章编号]1001—3601(2011)06—0372—0119—04 高活性谷氨酰胺酶豆豉芽孢杆菌的筛选及 glsA基因的克隆 詹寿年，吴拥军 ，郭倩倩，卢 彪 (贵州大学生命科学学院，贵州省农业生物工程重点实验室，贵州 贵阳 550025) [摘 要]为筛选获得高活性谷氨酰胺酶豆豉芽孢杆菌菌株，提高谷氨酸的含量，试验通过康维皿弥散 法对 525株芽孢杆菌进行酶活检测 ，获得一株产谷氨酰胺酶活力为68．407mgNH。／(g曲 ·h·37℃)的B． subtilisGA317菌株 ，其酶活力较 B．subtilisBJ3—2高5．59倍 。对2个菌株谷氨酰胺酶编码基 因glsA进行 克隆测序，结果表 明：2个菌株 glsA基因核酸序列和蛋 白序列同源性分别为 63 和 47 ，表现出较大的差 异 。B．subtilisGA317与B．subtilisBJ3-2蛋 白序列中都含有 a3，a6，B83个酶活性位点，分别位于蛋 白序列 中67—8O、117-125、260—267的3个区域 ，B．subtilisG317的a3区域有7个氨基酸发生改变，在a6和B8区域 各有 1个氨基酸发生改变。研究为进一步利用基 因工程技术改良菌种产谷氨酰胺酶活力奠定 了一定基础。 [关键词]谷氨酰胺酶；酶活中心；枯草芽孢杆菌；glsA基因 [中图分类号]S182；Q939．97 [文献标识码]A ScreeningandglsA CloningofDochiBacilluswithHighGlutaminaseActivity ZHANShou—nian，WU Yong—jun ，GUOQian—qian，LU Biao (GuizhouKeyLaboratoryofAgro-Bioengineering，CollegeofLifeSciences，GuizhouUniversity， Guiyang，Guizhou550025，China) Abstract：Enzymeactivitiesof525BacillusstrainsweredetectedbyConwaydiffusionmethod to screenoutDo chiBacillusstainwith high glutaminaseactivity and enhanceglutamicacid content．The resultsshowedthatB．subtilisGA317，aDochiBacillusstainwithglutaminaseactivity68．407mgNH3／ (gyeasy ·h ·37℃)which is5．59timeshigherthanthatofB．subtilisBI3『—2，wasobtained．TheglsA genewereclonedandsequencedwiththesetwo strains．According tosequencealignmentonnucleicacid andprotein，theirhomologieswere63％ and47％ respectively，whichshowedgreatdifferences．Protein sequencesofB．subtilisGA317andB．subtilisBJ3—2allcontainedthreeactivesitesofenzymea3，a6and B8． These active sites separately Iocated in three regions ranged of 67-8O， 117—125 and 260—267 respectively．Therewere7aminoacidschangedina3regionofB．subtilisG317，whiletherewasonlyone aminoacid changed in region cc6 and 138．Thisresearch established foundation forfurther studieson improvementofg