枯草芽孢杆菌HL29和根瘤菌XJ83097原生质体融合以及融合子特性的初步研究.pdfVIP

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2017-08-09 发布于安徽
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枯草芽孢杆菌HL29和根瘤菌XJ83097原生质体融合以及融合子特性的初步研究.pdf

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植物病理学报 ACTA PHYTOPATHOLOGICASINICA 35(6)(ZK)：108．110(2005) 融合以及融合子特性的初步研究卢志军，刘琛，刘西莉+ (中国农业大学植病系，北京100094) fusionofBacillussubtilisstrainHL29and Protoplast RhizobiumstrainXJ83097and characteristicsofthefusantsLU ofPlant Zhi-jun，LIUChen，LIU Xi．1i(DepartmentPathology,China AgriculturalUniversity，Beijing100094，China) 文章编号：0412-0914(2005)06-0108-03 原生质体融合即细胞融合，是20世纪70年代1．3田间试验用土发展起来的基因重组技术；近几十年来，随着研究沙／土／草炭=3：1：0．5。方法的不断改进，研究手段的日益更新，围绕着原 1．4试验药剂生质体的研究，已经形成了一整套的成熟的原生质体技术。利用原生质体融合技术可以获得具有双溶菌酶和氯霉素购于Sigma公司。亲优良特性的融合子，对于提高作物产量、改善品 1．5原生质体融合、筛选、遗传稳定性测定及其质、提高抗逆性以及实现高产稳产优质农业具有重生防效果和固氮活性的测定要意义。本试验旨在将具有高效固氮活性的根瘤菌XJ83097和具有良好生防效果的枯草芽孢杆菌养。首先采用带药平板法和试管液体摇培法测定 HL-29进行原生质体融合，并通过室内和田间试验 2个亲本菌株对不同抗生素的敏感性。并以酶解对融合子进行生理生化性状和抑菌、固氮活性等方法制备2个亲本菌株的原生质体。制备的面进行测定，以期筛选获得同时具有高效固氮和生 XJ83097原生质体置于15w紫外灯28cm下方处防效果的融合子。理10min灭活，然后在PEG诱导下，将含有 1材料和方法 500 混合，充分悬浮后静置5min，于3 r／rain离心 1．1 供试菌株 15min收集沉淀；向沉淀中加入NaCl高渗缓冲液悬浮并进行梯度稀释，取适量悬浮液于50℃的半枯草芽孢杆菌HL29(以下简称HL29)，根瘤固体再生基本培养基软琼脂中混匀，迅速倾入低层菌XJ83097(以下简称XJ83097)，苜蓿镰刀根腐病为再生基本培养基平板上，将上层铺平，于28℃恒菌，本实验室保存。温箱中培养，7d后观察结果。待平板上长出单菌 1．2供试苜蓿品种落，将其转接至含有50斗g／n1L氯霉素平板上进一 CW787，中国农科院畜牧所提供。