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利用蛋白质组学技术研究三氯乙烯 刺激肝细胞后蛋白质差异表达+ 刘建军黄海燕庄志雄李习艺袁建辉阳帆卫秦芝 Proteomicondifferential inhumanliverce study proteomicexpression withdifferentconcentrationoft afterstimulation YuanJianhui WetQJnzhi LiuJianjunHuangHaiyanZhuangZhixiongLIXiyi YangFan 2DPlatinum 泳分离蛋白质组成分，银染显色，经ImagerMaster5．0软件分组分析比较四组图谱，并对差异蛋 生改变。通过质谱鉴定和IPI 子机制提供线索。 关键词：三氯乙烯L．02肝细胞蛋白质组双向电泳基质辅助激光解吸，电离飞行时间串联质谱 剂等，可经呼吸道、消化道和皮肤吸收。TCE具有三致(致癌、致畸、致突变)作用及免疫毒。|生，对肝脏、心 脏及肾脏等实质脏器产生损害，并能引起严重的职业性药疹样皮炎”。1。近年来，国内外因职业接触TCE而引 起中毒的报道很多。然而，目前TCE具体的毒作用机制还不是十分明确，也未见用蛋白质组学方法研究TCE 中毒发病机理的报道。通过高通量的蛋白质组学技术研究TCE对生物体蛋白质组表达的影响，从蛋白质整体水 L一02肝细胞及其对照肝细胞总蛋白质表达差异，并利用基质辅助激光解吸，电离飞行时间串联质谱 毒作用相关分子标志物奠定基础，并为从分子水平上探索环境污染物对机体的影响开拓新途径。 I．材料和方法 1材料 TCE)，sigma公司产品，光谱纯，纯度≥995％。使用时，将其溶于二甲基亚砜(DMSO．sigmaj。 igml63 net，0755 作者简介，刘建军，女，硕士，主任技师，juni 755 2563 通信作者：庄志雄，教授．博士生导师，zxzhuang∞hotmail_COIU，0 140 Plusone产品，硫脲、碘代乙酰 甘氯酸、十二烷基磺酸钠(SDS)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)均为Amersham 0-14 (Mr97 水碳酸钠、碳酸氢铵、冰乙酸、盐酸、丙酮等均为国产分析纯。所有溶液均用Milli-Q水配制。 2DPlatinum 仪、SE600垂直电泳仪、高精度扫描仪、ImagerMaster TOF-TOFProteomics Biosciences公司产品，MALDI—TOF-TOF·MS质谱仪(4700Analyzer，ABI)。 2方法 其中DMSO终浓度为0．5％。 mol／L、 u (MTT法)和锥蓝拒染法确定，剂量分别为3 毒时将受试物加至新鲜无血清培养基混合均匀后，替换细胞瓶内的113培养基，继续培养24h后，醋酸镁缓；÷液 (1 10mmol／LTris)30min，离心1 Quant 重悬，2-D Kit蛋白质定量试剂盒进行蛋白定量。样品于一70℃冰箱保存备用。 向电泳。90“g总蛋白与重涨液(7mol／L尿素，2mol／L硫脲，2％CHAPS，0 uL覆盖油以防样品液蒸发，盖好盖子之后，置于IPGphor 胶面朝下放八胶槽中，保证没有气泡时、加入约390 50000Vhrs。等电聚焦结束后，IPG胶条在含50mmol／LTris-HCI，pH8 后换用30mA／胶，直至溴酚蓝到达胶的底线。分别取三批对照