大鼠与小鼠脑组织脱水方法的实验研究.pdfVIP

维普资讯 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol2003Feb；19(1) 。113 · · 中山园地 · 大鼠与小鼠脑组织脱水方法的实验研究 刘 洋 刘亚丽 时手感柔润，蜡片平整光滑润泽。染色后镜下：组织结构完 整，胞核清晰，染色质均匀；胞质透彻，细胞器清晰可见。免 【关键词】组织脱水；制片技术；小鼠；大鼠 疫组化片 ：反应物明显，背景干净。 【中图分类号】R446 文【献标识码】B 新旧方法比较：常规组织脱水方法原则要照顾到各种不 同器官组织的固定与脱水要求 ，因此各级高浓度乙醇均不超 【文章编号】 1001—7399(2003)01—0113—01 过 1h。用常规方法脱水处理的大小鼠脑组织在切片或脱蜡 近年来，我们在协助其他单位或研究生做动物实验后的 过程中易脱片，切片时有粘刀、蜡片皱褶不易展开等情况，染 组织病理学研究中发现，若按 日常人体标本的脱水时间和程 色结果不理想。切片后的蜡块随着时间的推移而出现表面 序制备大鼠与小鼠的脑组织蜡块，则在切片后进行染色前处 凹陷现象，说明常规方法脱水不够彻底。而经过改进的脱水 理及染色时会出现严重的脱片现象，从而造成后续工作无法 方法杜绝了上述 问题。 进行。即使在载玻片上涂蛋白甘油、多聚赖氨酸等防脱片剂 3 讨论 效果不佳，未脱片者的HE染色、特殊染色及免疫组化染色 结果也不理想。我们根据大鼠与小鼠脑组织磷脂含量高且 3．1 固定充分和从低浓度乙醇开始脱水非常重要。 与水结合牢固不易脱出的特点做了大量实验，摸索出一套适 3．2 根据资料得知，脑组织中含有大量的磷脂和水，其中磷 合于大鼠与小鼠脑组织的脱水方法，现介绍如下。 脂是由含有甘油的脑磷脂和一些不含甘油的神经磷脂组成 的。脑磷脂的合成是由甘油三酯的重要中间产物磷脂酸水 1 材料与方法 解为甘油二酯，其为脑磷脂的合成提供脂肪酸和甘油部分， 1．1 材料 按实验要求取大鼠与小鼠脑组织，大小 1．5crn 丝胺酸脱羧后生成乙醇胺。乙醇胺和胆碱参与脑磷脂合成 ×2crn，厚 0．4～0．6cm。实验器具为国产、进 口脱水机均 前先活化成CDP-乙醇胺，然后合成脑磷脂。脑磷脂在其合 可，无脱水机可用玻璃缸手工操作。化学试剂为甲醛、70％ 成、分解的整个生化活动中伴随有大量的能量的转变和交换 乙醇、80％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡(熔点58 (ATP／ADP)。在所有这些生化反应过程中需要大量的水作 -- 60℃)。 为媒体环境，故脑组织总含水量大大高于其它组织。再者脑 磷脂合成和分解都需要酶的作用，而这部分水分子在静态时 1．2 实验方法 1．2．1 脱水时间及程序 如用脱水机 ，可事先在机上的电 与脑磷脂的结合比较牢固。 脑菜单中按下表编排程序。(1)10％福尔马林液充分固定6 3．3 本方法最大特点是大大延长了大鼠与小鼠脑组织在高 h以上；(2)70％乙醇做初级脱水6h以上或长时间保存；(3) 浓度乙醇中的脱水时间。一般认为组织在高浓度乙醇内时 80％乙醇脱水6h；(4)95％乙醇 I：4h；(5)95％乙醇1／：4h； 间过长会使组织变得脆硬，包埋时组织易碎，切片时出现蜡 片