STDIn的耐受性研究及其在影响研究中的应用.pdfVIP

广西师范大学学报(自然科学版) JOURNAl．OFGUANGXINORMAI．UNIVERSITY 张小玲1，贾宏瑛1，李春迎1。阎宏涛2 (1陕西师范大学化学与材料科学学院．陕西西安710062；2西北大学化学系．陕西西安710069) 细胞(：a”紊乱常常是与氧化应急相关的机体功能异常的基础，诸如心律不齐、局部缺血再灌流、神经 变性和缺氧再给氧等．为了深入探讨这些现象产生的机理，大量研究以细胞外产生活性氧(或利用可诱发 验现象，首先必须了解Ca2+荧光探针自身对活性氧的敏感性．Narine等oo已对常用的两种ca”荧光探针 Fluo 移且具胞浆特异性的细胞ca2+荧光钙探针“’…．实验中，我们首先采用了四种不同的活性氧产生体系：① 术检测单细胞内Ca”STDIn荧光强度的改变，探讨了浓度梯度H。()。对胞内(：a2+浓度变化的影响，从膜 结构和生物信号转导的角度研究氧自由基对培养细胞的生物效应． 1结果与讨论 1．1 STDIn对活性氧的耐受性研究 实验将1gmol／l。Ca”荧光探针STDIn在10 分别与不同活性氧体系，其中：①试剂空白；②1mmol／I．H202；③100pmol／I．AA／5 1mmol／i。H mmol／I。H202／100 mmol／ 20z／5．mol／I，FeCl2；⑤l Il_mol／I，AA／5pmol／I。FeCl2；⑥0．1 I。H：O。／30(u·mI。)HPR；⑦o．2 合预氧化20min后，稀释100倍以终止氧化作用．然后于466rlm激发，记录荧光发射光谱，比较经活性氧 2 和Fluo3进行对照．结果如表1所示． 活性氧对荧光探针性能的影响表现在两个方面，一方面影响探针自身的荧光性能，另一方面影响探针 受性较Fura一2和Fluo 探针评价与活性氧相关的细胞内ca“的变化时，采用STDIn较Fura2和Fluo3更可靠，而采用后两者 时需格外谨慎，因为它们自身亦会不同程度地受活性氧的影响． 作者简介：张小玲(1963)，女．陕西佳县人，教授研究方向：功能试剂合成及其应用 第21卷 广西师范大学学报(自然科学版) 99 试剂空白 100 100 l()0 H，O， 100．4±57 98．5士4．8 95．9土47 H。0^，FeCl， 71．7±73 7I9±4．8 966±03 H：o2／AA／FeCl2 732±57 697±30 944±31 1 Hz0z／HPR ／ 94．1土4 黄嘌呤x／黄嘌呤氧化酶XO ／ 110±2】 1 2细胞荧光图像观察 HI，60细胞在ACAS570上观察，呈球形，轮廓清晰．经STDInAM标记后的细胞则周边荧光较强， AM标记后的胃底平滑肌细胞和心肌细胞中(图lb，C)．STDInAM这种 针．这一现象也出现在经STDIn 可靶向性导人细胞胞质区域的特性，将使其对胞浆[Ca”]．的响应相对于Fluo3更具有特异性、更准确． 前者所给出的是胞浆Ca”的动态变化情况，而后者所指示出的荧光信号将不仅包含胞浆Ca”信号，同时 也包含了胞核ca“信号的信息，特别是对于细胞群体的分析．