碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵和外膜孔蛋白表达水平的研究.pdfVIP

414 中国感染与化疗杂志 2008年 11月 21)日第 8卷第6期 ChinJInfectChemother，November．2008，Vol8，No 6 论 著 · 碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵 和外膜孔蛋 白表达水平的研究 李红玲 ， 廖 康 ， 陈亚岗 ， 俞云松 ， 李兰娟 摘要 ： 目的 探讨我国临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵 MexAB—OprM和外膜孑L蛋 白OprD 表达水 平及其与碳青霉烯类抗生素耐药性之间的关系 。方法 收集我国 15个省市 28所医院临床分离的铜绿假单胞菌 655株 ，琼脂 稀释法测定该菌加入外排泵抑制剂羟基氰氯苯腙(CCCP)前后对亚胺培南和美罗培南的 MIC；RTPCR检测外排泵 MexAB- OprM 和孔蛋白OprD!的表达水平 ；十二烷基硫酸钠一聚丙酰胺凝胶 电泳 (SDSPAGE)和蛋 白印迹 (Westernblot)检测外膜孔 蛋 白OprD!。结果 收集到的655株铜绿假单胞菌菌株对亚胺培南和美罗培南敏感率分别为 52．5 和 59．2 ，加人 CCCP 前后其对亚胺培南和美罗培南的敏感率无 明显变化 ；52．0 (51／98)美罗培南耐药株 MexABOprM显著高表达 (P0．05)， 43．7 (59／135)亚胺培南耐药株OprD!显著低表达(PO．05)，14．8 (20／135)亚胺培南耐药株 OprD2表达缺失；SDS 和 Western—blot显示与标准菌株 PAO1相 比，OprD。表达水平减低菌株 ZZ20显影减低 ，表达缺失菌株 BJ1不显影 。结论 MexAB-OprM表达升高和 OprD：表达降低甚至缺失是我国铜绿假单胞菌对美罗培南和亚胺培南耐药的重要机制。 关键词 ： 铜绿假单胞菌； 外排泵 ； 外膜孔蛋 白； 羟基氰氯苯腙 ； 实时荧光定量反转录聚合酶链反应 中图分类号：R978．11；378．991 文献标识码 ：A 文章编号：1009—7708(20()8)060414-05 LevelofM exAB-OprM and OprD2expression in earbapenem—resistantPseudo- monas P，．gzDn LIHong—ling， LIAOKang， CHENYa—gang， 【，Yun—song， LILan-juan． (NationalKeyLa— boratoryforJfectiousDiseases，theFirstAffiliatedHospital，ZhejiangUniversityMedicalSchoo1． Hangzhou 310003，China) Abstract： ObjectiveToinvestigatetheexpressionlevelofeffluxpumpMexAB-OprM andporinproteinOprD inP．aerugino— saandtherelationshipbetweentheirexpressionlevelandresistancetocarbapenems．MethodsA totalof655clinica1P． aer“gi— llosa isolateswerecollectedfrom 28hospitalsin 15Chinesecities．AgardilutiontechniquewasusedtodeterminetheM ICsof imipenem andmeropenem againstP．aeruginosabeforeandafteradditionofeffluxpumpinhibitorCCCP．Real—time—RT—qPCR wasusedtotesttheexpressionlevelofMexAB—OprM andOprD2．SDSandWestern—blotwereusedtoidentify()prD! ． ResultsThepercentageofthecollectedP．aeruginosa isolatessusceptib