转抗盐基因中天杨新品种扦插育苗耐盐试验.pdfVIP

转抗盐基因中天杨新品种扦插育苗耐盐试验1） 尹建道 张洪岭 王立霞 （天津理工大学，天津，300191） （天津市宁河苗圃场） 孙仲序 ﹡ 王淑英 杨进军 （山东农业大学） （天津理工大学） 摘 要 利用滨海盐碱土配制营养基质，采用盆栽扦插的方法，对转抗盐基因（mtl-D 基 因）中天杨新品种的耐盐能力、生长表现和根系发育状况进行了对比试验研究，结果表 明：随着土壤含盐量的增加，插穗存活率降低，生长量减少，仅 2‰盐度试验组生长正 常，叶色浓绿，存活率一直保持在 90％以上，4‰以上盐度试验组均因盐害而陆续枯死； 土壤盐害首先作用于皮部侧根，表现为新生皮部根褐变坏死，导致枝叶发黄、萎蔫，并 逐渐干枯死亡；扦插育苗前期，转基因中天杨与对照的耐盐能力和生长表现并无明显差 别，其原因可能与插穗中外源基因的表达过程有关。 关键词 中天杨；转基因植物；盆栽试验；扦插育苗；耐盐性 分类号 S722.36 杨树 （populus spp.）是我国北方地区的主栽树种之一，也是最早开 展基因工程研究的模式树种之一，一些功能基因已被成功导入杨树的细胞 基因组中，如转Bt基因抗虫欧洲黑杨植株 [ 1，2 ] 、转AaIT基因抗虫杨树植株 [ 3 ]等。针对我国盐碱地面积大、开发利用困难的现状，刘风华、孙仲序等 人[ 4 ]用PCR方法克隆了大肠杆菌 1-磷酸甘露糖醇脱氢酶基因 （mtl-D），利 用 土 壤 农 杆 菌 介 导 法 导 入 八 里 庄 杨 （ Populus × xiao zhannica,cv.“Balizhuangyang”），经卡那霉素筛选、分子鉴定和 Northern杂交等程序，证明外源基因已整合到染色体上，并且有转录，获 得了一批具较高抗盐性的转化植株。在抗盐性检测方面，孙仲序等人[ 5 ]在 实验室内进行了组培、水培、盆栽 3 个方面的抗盐性鉴定，尹建道等人[ 6 ]在 滨海盐碱地区进行了田间造林对比试验，均证明转化植株的耐盐能力较对 照有明显提高。目前，该转化植株已被正式定名为“中天杨”，并被国家 1).天津市教委科技发展基金项目（021211）和教育部留学回国人员科研启动基金资助项目。 第一作者简介：尹建道，男，1959 年 8 月生，天津理工大学环境科学学院，教授，博士。 ＊通讯作者：孙仲序 1 林业总局认定为“植物新品种”重点推广，为我国盐碱地区的造林绿化提 供了一条新途径。 扦插育苗是杨树扩繁的主要方法，也是杨树大面积栽培和新成果推广 应用的前提条件，扦插繁殖环节至关重要。为了对比鉴定转抗盐基因中天 杨新品种在扦插育苗环节的耐盐能力和生长表现，我们采用盆栽试验的方 法进行了研究，旨在为生产应用提供理论依据。 1、材料与方法 1．1 试验材料： 选用中天杨田间对比试验林当年萌生枝剪取插穗，长度 15cm 左右、粗 度 0.8～1.0cm，分为转基因中天杨和对照八里庄杨两个品种，秋末落叶后 同时剪取，沙藏备用。 1.2 试验方法： 试验在天津市宁河苗圃场的玻璃温室内进行，以免降雨时淋洗土壤盐 分。扦插基质选用现地的自然土壤配制，一类是含盐量很高的盐土，一类 是含盐量较低的苗圃土壤 （淡土），两者各取一定的比例，按照配制前后盐 分重量相等和土壤总重量相等建立二元一次方程组，即可求解配制某一目 标含盐量（g/kg）时的盐土、淡土重量比例（见表 1），并按各自的自然含 水率换算成自然土重量，称重后充分混合均匀，即为所需要的盐分梯度系 列扦插基质。