14基因工程与基因重组44.docVIP

第十四章 基因重组与基因工程 内容提要： 细菌的基因转移包括接合作用、转化作用、转导作用等。当细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA从一个细胞转移至另一个细胞，这种类型的DNA转移称为接合作用。通过自动获取或人为的供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型，这就是转化作用。由病毒携带将宿主DNA片段从一个细胞转移至另一细胞的现象或机制，称为转导作用。在接合、转化、转导或转座过程中，不同DNA分子间发生的共价连接即为重组。 重组DNA技术是在人们对自然界基因转移和重组的认识基础上创立的新技术。为研究基因的结构与功能，从构建的基因组DNA文库或cDNA文库分离、扩增某一感兴趣的基因就是基因克隆或分子克隆，又称重组DNA技术。一个完整的基因克隆过程应包括：1．分，即目的基因的获取及基因载体的选择。目的基因指科学家感兴趣的外源基因，其来源有几种途径：化学合成、PCR技术、基因组文库或cDNA文库中获得。载体是目的基因的携带者，常用的载体有质粒、噬菌体等。2．切，即限制性核酸内切酶的应用。限制性内切酶是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，是实现重组DNA技术的重要的工具酶。3．接，即将目的基因与载体连接形成重组体（或重组DNA）。4．转，即将重组体导入宿主菌（或细胞），根据采用的载体性质不同，将重组体导入宿主菌的方法有转化、转染及感染。5．筛，即重组体的筛选与鉴定，将重组体导入宿主菌后，通过适当形式的培养板生长即可获得一定的抗药菌落。利用原位杂交，和Southern印迹或免疫学方法对抗药菌落进行筛选，获得含目的基因的转化子菌落，再经扩增、分离重组DNA获得基因克隆。重组DNA 技术在疾病基因的发现，表达有药用价值的蛋白质，DNA诊断及疾病的预防等方面具有广泛应用价值，并促进了当代分子医学的诞生和发展。 一、选择题 【A型题】 1．下列DNA序列属于回文结构的是 （ ） A．ATGCCG TACGGC B．GAATTC CTTAAG C．GGCCGG CCGGCC D．TCTGAC AGACTG E．CTAGGG GATCCC 2．DNA经限制性内切核酸酶切割后，断端易于首尾相接，自行成环。这是因为存在着（ ） A．钝性末端 B．平端 C．粘性末端 D．5’端 E．3’端 3．限制性内切核酸酶的通常识别序列是（ ） A．粘性末端 B．聚腺苷酸 C．回文对称序列 D．RNA聚合酶附着点 E．甲基化“帽”结构 4．pBR322是 （ ） A．经人工改造的大肠杆菌质粒 B．天然的大肠杆菌质粒 C．天然的酵母质粒 D．经人工改造的大肠杆菌噬菌体 E．经人工改造的酵母质粒 5．免疫球蛋白的生成是通过以下哪个过程（ ） A．转化 B．转导 C．转染 D．转位 E．溶原 6．常用载体-质粒的特点（ ） A．是线形双链DNA B．插入片断的容纳量比λ噬菌体DNA大 C．含有抗药性基因 D．含有同一限制性内切核酸酶的多个切口 E．不随细菌繁殖而进行自我复制 7．基因工程的操作程序可概括为（ ） A．切、转、接、筛、分 B．转、接、筛、分、切 C．接、筛、分、切、转 D．筛、分、切、转、接 E．分、切、接、转、筛 8．cDNA文库指（ ） A．一个生物组织和细胞的全部基因信息 B．一个生物组织和细胞的全部mRNA信息 C．一个生物组织和细胞所表达的mRNA信息 D．一个物种的全部mRNA信息 E．一个物种的全部基因信息 9．限制性内切核酸酶（ ） A．可将单链DNA任意切断 B．由噬菌体提取而得 C．可将双链DNA序列特异地切开 D．可将两个DNA分子连接起来 E．不受DNA甲基化影响 10．在重组DNA技术中，不常用的酶是（ ） A．限制性内切核酸酶 B．DNA聚合酶 C．DNA连接酶 D．反转录酶 E．DNA解链酶 11．可作为重组DNA的目的基因的是（ ） A．mRNA B．tRNA C．rRNA D．基因组DNA E．mRNA和基因组DNA 12．以质粒为载体，将外源基因导入受体菌的过程称（ ） A．转化