10种中药成分对鸡胚成纤维细胞生长影响.pdfVIP

维普资讯 中国兽医学 报 2003年 11月 第23卷 第6期 ChinJVetSciNov．2003 Vo1．23 No．6 6Ol lO种中药成分对鸡胚成纤维细胞生长的影响 胡元亮，孔祥峰 ，张宝康，刘家国，王德云 (南京农业大学 中兽医学研究室，江苏 南京210095) 摘要 ：将鸡胚成纤维细胞(CEF)分剐与当归多糖(CAPS)、黄芪多糖 (APS)、板蓝根 多糖 (IRPS)、淫羊藿多糖 (EPS)、蜂 胶多糖 (PPS)、淫羊藿黄酮(EF)、蜂胶黄酮(PF)、黄芪黄酮(AF)、黄芪皂甙(AS)和人参皂甙 (GS)等 lO种 中药成分一 起加入到 96孔细胞培养板 中培养 ，分别在培养 24、36、48、6O、72h时用MTT法测定 中药成分对CEF增殖的影响。结 果表明，所有中药成分均能显著促进 CEF增殖，并有一定的量效和时效关系。 关t词 ：中药成分 ；鸡胚成纤维细胞 (CEF)；细胞增殖 中圈分类号：$853．7 文献标识码 ：A 文章编号：lOO5—4545(2003)06—0601-03 黄芪、当归、板蓝根、淫羊藿、蜂胶和人参是常用的补虚中 细胞培养板 (科威公司产 品)。 药 。研究表明，其 中许多成分具有免疫增强作用L1]。笔者从 1．3 方法 根据文献 [7～9]介绍的方法制备CEF，将细胞 中提取 了多糖 、黄酮和皂甙等 lO种 中药成分 ，并测定了它们 数词至 5X10个 ／mL后 ，加到 96孔培养板 中，每孔 100 L； 对体外培养鸡胚成纤维细胞 (CEF)的安全浓度。本研究测定 随后分组加药 ，实验组加入各种浓度 的中药成分 ，每孔 100 了在安全浓度范围内的 lO种 中药成分对 CEF增殖 的影响 ， t*L，每种浓度 4孔；对照组 ，每种药物 4孔 ，加入等量细胞生 旨在筛选 出免疫增强作用较好的中药成分 ，为研制新型免疫 长液；另设一无细胞孔作为测定时的空 白调零孔；均同时重复 增强剂提供依据 。 5块细胞板 ；然后置 37C、5 C0。培养箱 中培养 ，分别在培 养 24、36、48、6O、72h时各取 l块细胞板 ，按下述 MTT法L7 1 材料与方法 测定细胞增殖情况 。 1．1 试验药物 取待测细胞板，每孔加入 3O LMTT，继续培养 4h后取 1．1．1 多糖 5种 ，即黄芪多糖 (astragaluspolysaccharide， 出，快速翻转培养板 ，甩去孔 内培养液 ，每孔加入 150 L裂解 APS)、当归多糖 (Chineseangelicapolysaccharide，CAPS)、蜂 液 ，室温震荡 10rain使结晶溶解 。然后用酶联免疫检测仪浏 胶多糖 (propolispolysaccharide，PPS)、淫羊藿多糖 (epimedi— 定 570am波长下光密度 (D)值 ，作为细胞增殖的指标 。数据 ampolysaccharide，EPS)和板蓝 根多糖 (isatisrootpolysac— 用 SPSS软件统计分析 ，比较细胞增殖 的差异性 。 charide，lRPS)，用水煎醇沉法提取 ，硫酸蒽酮法测定含量 。 2 结果与分析 1．1．2 黄酮 3种 ，即黄芪黄酮 (astragalusflavone，AF)、蜂 胶 黄酮 (propolisflavone，PF)和 淫 羊藿 黄酮 (epimedium 2．1 APS对CEF增囊的影响 见表 l 60h时，各浓度组 的 flavone，EF)，分别用聚酰胺柱层析法 (AF和EF)和酸碱沉淀 D值均显著大于对照组，其余时间点高浓度组的D值小于或 法 (PF)提取 ，用芦丁法测定含量 。