07_萎蔫短小杆菌糖甜菜致病变种实时荧光定量PCR检测.pdfVIP

江苏农业科学 　2007年第 5期 —65 — 萎蔫短小杆菌糖甜菜致病变种的实时荧光定量 PCR检测 李 　博 , 李金庆 , 尹燕妮 , 郭坚华 (南京农业大学植物病理学系 ,江苏南京 2 10095) ( ) 　　摘要 : 依据萎蔫短小杆菌糖甜菜致病变种 Cu rtobacterium f laccumf aciens p v. beticola 的 16S～23S rRNA 间隔 区 ITS序列 ,设计引物 CfbF /CfbR 。PCR 扩增 3个糖甜菜叶斑菌及 29个参比菌株 ,仅靶标菌扩增出 191 bp 产物 。 用 SYRB Green I荧光染料进行实时荧光定量 PCR 检测 ,制作标准曲线 , 回归直线决定系数 R2 为 0. 99。整个检测 过程操作便捷 ,仅需 2 h,可灵敏 、特异 、定量地对该病原菌进行检测 。 　　关键词 : 萎蔫短小杆菌糖甜菜致病变种 ; 实时荧光定量 PCR ; 标准曲线 　　中图分类号 : S435663　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 1002 - 1302 (2007) 05 - 0065 - 04 ( ) 　　糖甜菜 B eta vu lg a ris var. saccha rif era 是我国 高 ,有些地块达 100% ,对糖甜菜的生产构成严重威 [ 1 ] ( ) 北方地区广泛种植的重要的糖料和饲料作物 。萎蔫 胁 。目前糖甜菜叶斑病菌 BV 的检测仅依靠表 ( 型特征 、生理生化特性 、血清学反应等传统鉴定方 短小杆菌糖甜菜致病变种 Cu rtobacterium f laccumf a ciens p v. beticola) 引起的糖甜菜叶斑病田间发病率 法 ,步骤繁琐 、耗时耗力 、灵敏度低且不稳定 ,不宜广 泛应用 。迫切需要建立一套灵敏 、特异 、快速的检测 收稿日期 : 2007 - 03 - 22 技术 。 ( ) 基金项 目: 国家自然科学基金 编号 : 3057 12 11 ; 国家高技术研究发 实时荧光定量 PCR 技术于 1996 年由美国 Ap ( ) 展计划资助项 目 编号 : 2003AA249020 。 p lied B io system s公司推出 ,指在 PCR 反应体系中加 ( ) 作者简介 :李 　博 1982 — ,男 ,河北怀来人 ,硕士生 ,研究方向为植 入荧光基团 ,利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 物病原细菌的分子检测 。 进程 ,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析 通讯作者 :郭坚