氟哌酸-铽配合物与DNA+的相互作用及其分析应用.pdfVIP

第三届全国环境化学学术大会论文集 3.2 紫外光谱 由紫外吸收光谱可以看出，当氟哌酸溶液中加入DNA 后（已扣除DNA 的 吸收），氟哌酸的吸收略有增加，这表明氟哌酸与DNA 有微弱的作用；当氟哌酸-铽溶液中， 加入DNA 后，吸收峰略有降低，同时吸收峰红移了2 nm 。 3.3 氟哌酸-铽配合物与EB 对DNA 结合位的竞争 EB （溴化乙锭）是常用的DNA 插入剂 而被用于DNA 的研究，由图2 可以看出，在游离的EB 溶液中加入DNA ，EB 的紫外吸收 峰迅速下降，而且吸收峰红移了3 nm，表明EB 分子的部分基团插入DNA 碱基对中，导致 EB 的紫外吸收减弱；当在EB-DNA 溶液中加入氟哌酸-铽时，EB 的紫外吸收又明显增加， 但仍低于游离 EB 溶液，这表明氟哌酸-铽的加入挤占了 DNA 的部分结合位，置换出部分 EB ，使EB 的紫外吸收增强。 4 分析应用 根据DNA 对氟哌酸-铽离子配合物的荧光增强效应，建立了灵敏测定DNA 的稀土配合 物荧光探针。测定的线性范围与检出限如表1 所示。从表1 可以看出，该稀土配合物探针测 定DNA 的检出限比大多数已报道的光谱测定法要低近一个数量级，而且线性范围也要宽得 多。对人工合成的不同DNA 样品的加标回收率都在91.5% - 99.6%之间。 Table 1 Linear range and detection limit for DNA determination Species Linear range ( μg/mL) Correlation coefficient (r) Detection limit ng/mL (S/N=3) hs DNA 0.005-1.0 0.9974 0.9 denatured 0.005-1.0 0.9957 0.6 ct DNA 5 氟哌酸-铽配合物与DNA的作用及荧光增强机理探讨 小分子探针与核酸的非共价键结合方式主要包括静电式、沟槽式与插入式三种结合方 式。一般来说，小分子探针与DNA 相互作用后，会引起吸收谱带变宽、红移（或紫移）效 应和减式（或增色）效应。根据Long 的理论, 减色和红移是小分子与DNA 发生插入作用的 标志，从紫外光谱可以看出，氟哌酸-铽溶液中，加入DNA 后，紫外吸收峰略有降低，同时 吸收峰红移了2 nm，表明氟哌酸- Tb3+ 的结合方式主要是插入式而不是沟槽式结合，这从氟 哌酸-铽配合物与EB 竞争DNA 结合位的紫外吸收变化上得到证实，正是氟哌酸-铽配合物 的插入作用，才能把插入的EB 分子挤出来。因此，氟哌酸- Tb3+与DNA 的结合方式包括 3+ Tb 与DNA 中磷酸根之间的静电结合和插入式结合。 铽离子的配位数是6-8，在水溶液中，铽离子与氟哌酸分子中的羰基与羧基形成配合物， 而在氟哌酸-铽-DNA 体系中氟哌酸与铽离子的络合比是1:1,，显然铽离子是不饱和配位。因 此，氟哌酸- Tb3+易与水分子配位而形成氟哌酸- Tb3+-（O-H ）配位结构，氟哌酸- Tb3+-（O-H ） 2 n 2 n 络合物中的Tb3+有多余的正电荷，很容易与DNA 双链上的磷酸根负离子产生静电作用或 与其它基团络合，并伴随着释放出氟哌酸- Tb3+- （O-H ） 络合物中的H O，从而降低了水 2 n 2 分子中O-H 键振动引起的非辐射能量损失，减少了由非辐射能量损失而引起体系荧光强度 的降低，因而DNA 的加入使氟哌酸- Tb3+络合物的荧光增强; 另一方面，目前已有研究证实 3+