DNA分子标记技术与其在玉米育种中的应用.pdfVIP

维普资讯 安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2008，36(2)：451，787 责任编辑 张杨林 责任校对 王 森 DNA分子标记技术及其在玉米育种中的应用 鞠方成 (辽东学院农学院，辽宁丹东118003) 摘要 综述 了近年来分子标记技术在玉米遗传图谱构建、目标基 因定位、遗传多样性研究、品种真实性鉴定及分子标记辅助选择 中 的应用情况。 关键词 分子标记 ；玉米；育种 中图分类号 Q78 文献标识码 A 文章编号 0517—661l(2008)02—00451—01 1 分子标记技术概况 从此 ，分子标记技术在玉米中的应用研究快速发展 ，到 1．1 限制性片段长度多态性 (RFLP) RFLP是用 限制性 1999年 ，明确的基因分子标记 已经达到 16000个，其中明 内切酶酶解样品DNA，从而产生大量的限制性片段，通过 确定位的基因位点 1270个。 凝胶 电泳将 DNA片段各 自的长度分开，然后将凝胶 中的 2．2 基因定位 目前，利用分子标记技术，在玉米上已定 DNA变性，通过 S0uthernblotting转移到硝酸纤维素滤膜等 位了许多重要农艺性状基因。质量性状方面主要有与育性 支持膜上，使DNA单链与支持膜牢固结合，再经同位素或 有关的基因标记和与抗性有关的基因标记。Sisco(1994)找 地高辛标记的探针与膜上的酶切片段分子杂交，通过计算 到与玉米 C组雄性不育恢复基因Rf．相距 1．5cM的分子标 放射性 自显影显示出杂交带 ，即检测出限制性片段长度多 记NPH14，并将 Rf．定位到第 8号染色体上。国内石永刚等 态性。在同一种内切酶酶解不同品种或同一品种不同个体 (1997)找到了玉米 S组育性恢复基因尺 相连锁的两个标 时，由于 目标 DNA既有同源性又有变异 ，因而酶切片段长 记，一个距离为4．8eM的RFLP标记 ，另一个距离为 2．3eM 度就有差异，不同材料显示的杂交带位置也有差异，这种差 的RAPD标记。数量性状上 已经有一些QTL，如株高 、抗旱 异就是限制性片段长度多态性。 性、籽粒含油量、产量等被定位在分子遗传图谱上，在所构 1．2 随机扩增多态性DNA(RAPD) RAPD是通过分析遗 建的图谱上都发现了一个或少数几个QTL，它们能够单独 传物质DNA经过PCR扩增的多态性来诊断生物体内在基 说明表型变异的50％。如 Stuber(1995)等人已利用分子标 因排布与性状表现规律的技术。RAPD利用PCR技术从扩 记将玉米高产基因从 自交系TX303转移到B73中，从 Oh43 增的片段上分析多态性，由于片段被引物选择性地扩增，扩 转移到M017中，育成了B73和M017各 自的增强型 自交 增了的片段能在凝胶上清晰地显现出来，然后通过同种引 系 ，用其组配的杂交种 比对照增产 15％。 物扩增条带的多态性反映出模板的多态性。 2．3 杂种优势群的划分 刘新芝(1997)利用 RAPD标记首 13 简单重复序列(SSR)SSR又称微卫星 DNA(Micmsatel— 次对我国目前推广杂交种的 15个主要亲本 自交系进行了 liteDNA)是一种 由2～5个核苷酸为重复单位组成的长达 类群划分。结果表明，用 RAPD标记进行玉米 自交系类群划 几十个核苷酸的串联重复序列，广泛分布于整个真核生物 分与系谱法一致。袁力行(2000)等利用 RFLP、SSR、AFLP和 基因组中不同座位上，每个座位重复单位的数量可能不完 RAPD4种分子标记方法研究了 15个玉米 自交系的遗传多 全相 同，因而形成多态性。每类微卫星DNA两端多为相对 样性，认为4种标记都可用于玉米种质的遗传多样性研究， 保守的单拷贝序列，可根据两端序列设计一对特殊引物，进 结果与系谱分析基本一致，但是 SS