2012-10-02银鲫“鳃出血病”组织浆灭活疫苗制备和其免疫效果.pdfVIP

银鲫“鳃出血病”组织浆灭活疫苗制备及其免疫效果 陈昌福1） 2） 3） 2） 2） 孟宪东 郭 庆 陈亮波 金 玲 1） （华中农业大学水产学院，武汉 430070 ； 2）盐城裕达饲料有限公司，江苏盐城 224341 ； 3）江苏省射阳惠裕饲科技有限公司，江苏盐城 224341 ） 摘 要 为了探讨苏北地区人工养殖银鲫（Carassius auratus gibelio）“鳃出血病”的有 效预防措施，取呈现“鳃出血病”典型症状的银鲫鳃组织与肝、脾、肾等内脏器官，制作成 组织浆灭活疫苗，选择平均体重为（255.0±12.0 ）g 和（73.0±6.0）g 的银鲫，分别作为试验 成鱼和幼鱼。经胸鳍基部对每尾成鱼注射0.3mL、幼鱼注射0.2mL 的组织浆灭活疫苗后，将 经过免疫接种的银鲫分别在室内水族箱中和室外小型池塘中继续饲养21d，待受免银鲫产生 免疫应答。随后利用未经灭活处理的病鱼组织浆对免疫后的试验鱼注射攻毒，检测了接种组 织浆灭活疫苗对不同规格银鲫的免疫保护效果。试验结果表明，在室内、外饲养的试验鱼经 过未经灭活的组织浆攻毒后，与未经接种组织浆灭活疫苗的对照组银鲫相比，没有显示出任 何免疫保护率。说明采用患“鳃出血病”的银鲫组织浆灭活疫苗接种健康银鲫的免疫接种方 法，不能有效地预防银鲫“鳃出血病”的发生。推测其原因可能是由于银鲫“鳃出血病”的 致病病毒属于具有囊膜的疱疹病毒，受免鱼产生的免疫应答是针对来自于鱼体自身组织的囊 膜，而难以针对病毒粒子本身产生免疫应答的缘故。 关键词 银鲫；鳃出血病；组织浆灭活疫苗；免疫接种 2009 年以来，在我国苏北地区的养殖银鲫（Carassius auratus gibelio）的所谓“鳃出血 病”已经给养殖者造成了极为严重的损失。因为该病具有发病特急、病程很短、死亡率奇高 的特点，这种疾病一旦发生，养殖业者根本就来不及采取任何治疗措施就已经出现批量死亡。 [1] 已有研究结果证明，银鲫的这种“鳃出血病”的病原体可能是一种疱疹病毒 。 上世纪七十年代，人们利用患草鱼（Ctenopharyngodon idellus）出血病的病鱼组织浆制 备出“草鱼出血病组织浆灭活疫苗”，注射接种草鱼鱼种后能有效地预防由呼肠孤病毒引起 的草鱼出血病，该方法至今仍在我国南方的养殖业者用于草鱼出血病的预防[2] 。 本研究借鉴“草鱼出血病组织浆灭活疫苗”的制备技术，利用来源于具有典型“鳃出血 病”症状的银鲫的各种组织，制备了银鲫鳃出血病组织浆灭活疫苗，对健康银鲫进行了免疫 接种防病试验，现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 病鱼来源与组织浆疫苗制备 具有典型“鳃出血病”的银鲫来源于江苏省盐城地区的水产养殖场。在无菌条件下，取 患病银鲫病鱼的鳃、肾、脾、肝和显症肌肉、肠等组织，称重后剪碎并经过匀浆机匀浆后， 加入0.85 ％无菌生理盐水，以双层纱布过滤并在低温下以3000r/min 离心0.5 h，取上清液以 -1 无菌生理盐水调节至10 的组织浓度。 按组织浆上清液的量加入终浓度为100.0µg/mL 和100.0µg/mL 的青、链霉素，再加入终 浓度为0.2% 的甲醛溶液，混匀后分装于玻璃瓶中，密封，置36℃恒温培养箱中灭活72 h。 在灭活过程中，每天充分摇动2~3 次。灭活过程结束后，取灭活疫苗样品进行对银鲫的进行 安全试验，证明其安全性后，置4 ℃冰箱内保存，作为银鲫鳃出血病组织浆灭活疫苗备用。 1.2 疫苗的接种 将上述制备好的银鲫鳃出血病组织浆灭活疫苗，对平均体重为（255.0±12.0 ）g 的银鲫 成鱼和（73.0±6.0 ）g 的银鲫幼鱼，沿胸鳍基部每尾成鱼注射0.6mL、幼鱼注射