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生物样品中肽类药物SPI-20定量分析方法研究.pdf
生物样品中肽类药物SPI-20 定量分析方法研究
药学院 3041909032 谢岑 药物制剂0401
指导老师 钟大放研究员 上海药物研究所
陈笑艳研究员 上海药物研究所
摘要
背景:SPI-20 为全合成的μ阿片类受体激动剂的候选药物,是皮啡肽的衍生
物。它对于μ受体具有高选择性,镇痛作用显著且副作用小,可能成为新一代镇
痛药。SPI-20 为四个氨基酸组成的肽类药物,相对分子质量为595.7,具有极性
大、不易透过生物膜、易酶解等特点。液相色谱-质谱联用法将色谱的高分离性
能和质谱的高鉴别特点相结合,组成了较完美的现代分析技术,近年来已被广泛
用于药代动力学研究。本课题以SPI-20 为模型药物,拟建立SPI-20 的LC-MS/MS
生物分析方法,研究此类候选药物在SD 大鼠体内药动学特征。
目的:建立灵敏、快速的液相色谱- 串联质谱法测定生物样品中的 SPI-20,
并应用于SPI-20 SD 大鼠药代动力学的研究,为新型肽类阿片受体激动剂的开发
提供依据。
方法:使用同位素标记物氘代SPI-20 作为定量分析时的内标。色谱条件为:
分析柱采用Waters Atlantis® HILIC Silica色谱柱(150 mm × 2.1mm, 5μm );流动
相为甲醇:水: 甲酸(70: 30: 0.1, v/v/v );采用流速梯度洗脱:0.1 ~ 1.8 min,流速
为0.50 ml/min ;1.8 ~ 1.9 min,流速为0.5 ~ 0.65 ml/min ;1.9 ~ 3.5 min,流速为
0.65 ml/min ;柱温30℃;进样量20 μl 。质谱条件为:离子源为电喷雾电离源(ESI
源);离子源喷雾电压为4.2 kV ;加热毛细管温度为350℃;鞘气(N2 )压力35 Arb ;
辅助气(N )压力5 Arb;碰撞气(Ar )压力2 mTorr ;碰撞诱导解离(CID )电
2
压均为30 eV;正离子方式检测;扫描方式为选择反应监测(SRM),用于定量
分析的离子反应分别为m/z 298.6 →m/z 84.0 ,120.0 (SPI-20);m/z 303.5 →m/z
84.0,125.0 (内标,氘代SPI-20);扫描时间为0.2 s 。50 μl血浆样品采用沉淀蛋
白法结合固相萃取法进行预处理,使用Waters Oasis® HLB cartridge (1cc/30mg)
固相萃取小柱,用1%乙酸甲醇洗脱。在上述条件下,SPI-20 和SPI-20 氘代内标
的保留时间分别为0.92 min和0.91 min 。应用上述方法进行SPI-20 SD大鼠体内的
药代动力学研究,考察SD大鼠以不同给药方式(灌胃给药,静脉注射和皮下注
射)、不同剂量组(分别为 1.0 mg/kg,3.0 mg/kg和10.0 mg/kg)给药后的药代动
力学情况。
结果:成功建立了灵敏、专属的LC–MS/MS方法,应用于SPI-20 SD大鼠药
代动力学的研究。本分析方法的线性范围为0.300 ~ 1000 ng/ml,定量下限为0.300
ng/ml ;日内、日间精密度(RSD )均小于8.0%,准确度(RE )在 −2.1% ~ 0.2%
之内;SPI-20 三个浓度的提取回收率均高于56.5%,内标的提取回收率为67.7% ;
基质效性不影响SPI-20 在血浆中测定的准确度;SPI-20 血浆样品4°C保存1 h、
经历1 次和3 次冷冻-解冻循环及提取后室温放置24 h稳定,RE在 −8.3% ~ 0.2%
之间。SD大鼠体内药动学结果显示,SPI-20 灌胃给药后几乎不吸收,皮下注射
后吸收较快,迅速达峰,tmax 为0.250 ~ 0.417 h (s.c. );皮下注射和静脉注射后,
SPI-20 主要药动学参数t1/2分别为3.75 ~ 5.43 h (i.v. )和4.16 ~ 6.15 h (s.c. ),CL
分别为331 ~ 470 ml/h/kg,(i.v. )和381 ~ 460 ml/h/kg
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