经细胞死亡相关蛋白激酶mRNA表达及凋亡的影响.pdfVIP

·697· !垦垂重瘟鱼塑蜃兰!!塑堡!!旦璺!!鲞箜!!塑堡!i!竺!!竺!竺丛型!型!翌竺盐!垫!!：∑!!：!!!塑!：!! -研究报告· 丙泊酚对大鼠脑创伤后神经细胞死亡相关蛋白激酶 mRNA表达及凋亡的影响 梁敏 李艳王宇田 【关键词】脑创伤}死亡相关蛋白激酶；凋亡，丙泊酚；太鼠 死亡相关蛋白激酶(DAPK)[1]可出 7一CCGA 脂肪乳剂治疗组给予打击后通过留置针 (GAPDH)为参照，上游引物：5 现于脑缺血和创伤性脑损伤后神经细胞 持续泵注体积分数为10％的脂肪乳剂 (2 凋亡启动阶段信号转导级联反应定型之 m1．k91·h_1)4h；丙泊酚治疗组 5 A一3 前，其基因表达与多种促凋亡信号转导 给予打击后通过留置针持续泵注丙泊酚 7；荧光探针：5’一FAM荧光素-CATC 的生物分子作用有关Ⅺ’3]。已证实丙泊酚 h。 注射液(2ml·kg“·h-1)4 ● 具有脑保护作用，其作用机制还未完全 1．2检测指标及方法：24h后断头活杀 RA一3’。 阐明，本研究中通过观察丙泊酚对大鼠 大鼠取出脑组织．以脑挫裂伤区为中心 1．2．2脑神经细胞凋亡测定：采用原位 脑外伤后神经细胞DAPKmRNA表达冠状切取约0．5cm厚脑组织。多聚甲醛 的影响。探讨其对脑组织的保护机制。 水溶液固定48h．常规乙醇梯度脱水、二 亡试剂盒由深圳晶美生物有限公司提 1材料与方法 甲苯透明、石蜡包埋．做连续5um厚的供，按照说明书操作。在损伤区、损伤周 1．1 动物分组及模型建立：60只雄性 冠状切片，用以测定神经细胞凋亡情况。 边区和非损伤区随机计数100个神经细 Wistar大鼠(购自广东省实验动物中做DAPK测定的脑组织不用固定、以损胞，记录染色阳性的细胞数。 心)，体重(250±50)g。按随机数字表法伤最明显点为中心取约厚0．4cm左半1．3统计学方法：应用SPSS13．0统计 分为正常对照组、假手术组、腩损伤组、 冠状切片，迅速置入RNA保存液中。 软件包对数据进行统计处理，计量资料 生理盐水对照组，脂肪乳剂治疗组、丙泊 1．2．1 脑组织DAPKmRNA表达的 以均数±标准差(z±5)表示，组间比较 酚治疗组，每组10只。腹腔注射水合氯 检测：采用逆转录一聚合酶链反应(RT—用方差分析和q检验，P0．05为差异 醛麻醉大鼠．采用Feeney自由落体脑损PCR)，氯仿／异丙醇提取RNA，取4pl 有统计学意义。 伤装置．用40 cm高处坠落 g砝码于25 RNA模板进行逆转录反应。反应条件：2结果 造成左顶叶重度脑挫裂伤模型(致伤冲 37Clh．95C3rain。荧光定量PCR反表1结果显示。脑创伤后损伤区、 击力1000 应条件：93C2 rain，93C30S，55C g／cm)，尾静脉留置套管针供 损伤周边区神经细胞过度表达DAPK 给药用。打击后缝合伤口，大鼠出现短暂 45s，共40循环。采用Primer expressmRNA，并且出现明显的神经细胞凋亡， 四肢抽搐、呼吸暂停数秒，表明模型致备 2．0软件设计引物探针：R—DAPK上游引与正常对照组和假手术组比较差异均有 成功。术后24h取标本。正常对照组不 物：5，_C(；CGCA