胶原三肽促皮肤胶原蛋白合成功效研究.pdfVIP

■蛋嚣 ACADEM IC FORUM IllU 胶原三肽促皮肤胶原蛋 白 合成功效研究 ● 杨国燕 袁宏丽 陈栋梁 王阿敬 l武汉肽类物质研究所 2中国多肽产业集团发酵工程研究中心 摘 要：本试验研究胶原三肽 (CTP)对NIH3T3细胞增殖的影响，并采用 “D一半乳糖皮下注射制备小鼠衰老模型”， 取受试小鼠皮肤测定羟脯氨酸 (HYP)含量，观察皮肤胶原蛋白含量的变化。结果表明，CTP能增强NIH3T3细胞活性，显著 增加皮肤胶原蛋白含量。这告诉我们，CTP有助于促进成纤维细胞的增殖，从而加强皮肤胶原蛋白的合成，最终增加皮肤中 胶原蛋 白的含量。 关键词：胶原三肽皮肤 胶原蛋白NIH3T3 胶原蛋白是哺乳动物体内含量最多的蛋白质，也是器官中结 1．2试验动物 缔组织的主要成分，它在体内一般作为组织的支持物和填充物， 从华中科技大学实验动物中心购置昆明清洁级小白鼠(雄I生) 主动参与细胞的迁移、分化及增殖，并与创伤的修复及胚胎的发 48只，体重25～30g。试验分为4组，即正常对照组、模型组、CTP 育过程有关ll_1。皮肤组织中胶原蛋 白占72％以上，真皮中占80％ 高剂量组、CTP低剂量组，每组 l2只。 以上。皮肤中的胶原蛋白老化或含量不足时，皮肤粗糙、干燥、松 1．3仪器 弛细纹等老化迹象就会浮现。 倒置显微镜 (上海长方光学仪器有限公司)，721型紫外分光 关于外源性胶原蛋白作为体内胶原蛋白的补充的研究与应用 光度计。 日益广泛，I型胶原蛋 白常用于医学整形4[1，1I型胶原蛋 白也可作 2方法 为药物进行关节炎的治疗 1。 2．1CTP对小鼠胚胎成纤维细胞增殖的影响试验 人体皮肤中含量最高的胶原蛋白的最小结构单元是一种在N 2．1．1NIH3T3细胞的传代培养 端带有甘氨酸的胶原三肽 (Collagentripeptide，CTP)，其结构可 吸除培养瓶内培养液，留下NIH3T3细胞，向瓶内加入消化液 以表示为 (Gly—X—Y)。当它应用于皮肤表面时，无过敏现象，并 约3mL，以覆满瓶底为限。消化2 分钟，当发现细胞质回缩，细 呈现出优异的保湿效果。微量射线 自动照相法研究表明，CTP具 胞问隙增大后，立即加入适量约2mL含 10％d~牛血清的DMEM培 有约280D的平均分子量。实验证明：CTP能有效的渗入角质层、 养液终止消化。1,000rpm离心5min，去上清，加入3mL培养液重 真皮层和头发根部细胞 内，增强细胞活性，从而促进真皮层纤维 悬，形成细胞悬液。计数板计数后，把细胞悬液分成 1×106个m／L 细胞合成透明质酸lt1，同时CTP也具有抑制动脉粥样化、促进骨 等份分装入数个培养瓶中，置37~C、5％CO，、饱和湿度条件下培 伤愈合等特殊功能 1。 养。培养48h和96h后更换培养液，以去除未贴壁的细胞。 本文重点研究了采用定向限制性酶切技术制备的CTP对 2．1．2CTP对NIH3T3增殖的影响试验 (MTT法) NIH3T3细胞增殖的影响及对受试小鼠皮肤羟脯氨酸 (HYP)含量 制备单细胞悬液，5000个 ／mL的浓度接种于96孔培养板，每 的影响，探讨CTP补充皮肤胶原蛋白含量的效果。 个孔中加细胞悬液 100~L，分为5组 (1个空白对照组，5个试验 1材料 组)，每组3个平行样。置37~C、5％CO，、饱和湿度条件下培养 1．1试剂与材料