PCR-mtDNA技术鉴别检测不同动物肌肉组织与饲料中鸭源性成分.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, October 25; 24(10): 1832-1836 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 技术与方法 PCR-mtDNA 技术鉴别检测不同动物肌肉组织和饲料中 鸭源性成分 1 2 3 张娟 , 宗卉 , 张利平 1 宁夏大学政法学院, 银川 750002 2 深圳检验检疫局, 深圳 518000 3 甘肃农业大学动物科学技术学院, 兰州 730070 摘 要: 以鸭肌肉组织DNA 为模板, 利用PCR-mtDNA 技术成功克隆出了鸭mtDNA COIII 基因(GenBank Accession No. DQ655706) 。对所克隆的序列分析表明, 其序列包括鸭细胞色素C 氧化酶III(COIII)基因全序列784 bp, 通过同源性分析可 知, 动物的线粒体DNA COIII 基因是相对保守的, 利用此特性设计PCR-mtDNA 方法鉴别检测鸭源性成分的特异性引物; 以各种动物肌肉组织及饲料DNA 为模板进行PCR 扩增、经反复验证筛选出只能扩增出鸭DNA 的目的片段, 而不能扩增 出其他动物DNA 片段的特异性强、稳定性好的引物P3 、P4; 利用此引物PCR 扩增鸭DNA 的特异性片段为226 bp, 对PCR 产物进行测序分析可知与已克隆的鸭mtDNA COIII 基因同源性达到 100%, 证明了所筛选引物的准确性。通过对不同含量 的DNA 模板溶液进行PCR 扩增的方法, 对筛选出的特异性引物P3 、P4 进行灵敏度试验, 结果分析表明灵敏度约为0.001%, 证明该PCR 方法具有特异性强、灵敏度高的特点, 完全可作为鉴别不同动物肌肉组织和饲料中鸭源性成分的方法。 关键词: 鸭源性成分, 鉴别检测, 线粒体 DNA, 细胞色素C 氧化酶Ⅲ基因, 不同动物肌肉组织和饲料, 克隆 PCR-mtDNA for Detecting Components of Duck Origin in Foodstuff and Feedstuff 1 2 3 Juan Zhang , Hui Zong , and Liping Zhang 1 School of Political and Law, Ningxia University, Yinchuan 750002, China 2 Shenzhen Inspection and Quarantine, Shenzhen 518000, China 3 Gansu Agricultural University Faculty of Animal Science and Technology, Lanzhou 730070, China Abstract: Mitochondrial cytochrome oxidase