一株中度嗜热嗜酸硫氧化杆菌的分离与系统发育分析.pdfVIP

维普资讯 44卷 3期 微 生 物 学 报 Vo1．44 NO．3 2004年 6月 Acta Microbiologica Sinica June 2004 一 株 中度嗜热嗜酸硫氧化杆菌的分离和系统发育分析 刘 缨 齐放军 林建群 田克立 颜望明 (山东大学微生物技术 国家重点实验室 济南 250100) 摘 要 ：从云南腾冲温泉酸性水样分离得到一株 中度 嗜热嗜酸硫氧化杆菌 MTH一04，对分离菌株进行 了形态 、生理 生化特性研究及 16SrDNA序列分析。该菌株为革兰氏阴性细菌 ，短杆状 ，菌体大小(0．6～0．8)z／m ×(1—2)／zm，化能 自养 ，可利用硫磺 、四硫酸盐、硫代硫酸盐为能源生长 ，不能利用蛋 白胨 、葡萄糖 、酵母粉 ，也不能进行混合型生长 。 最适生长温度在 40℃ 一45℃之间，最适生长 DH2．0—3．0，代时 8h。以 16SrDNA序列 同源性为基础构建 了包括 l3 株相关种属在 内的系统发育树 ，结果表 明，MTH一40 与喜温硫杆菌 (Thiobacilluscaldus)处于同一进化树分支 中，相似 性达 99．5％以上 。 关键词 ：中度嗜热嗜酸硫氧化杆菌 ，16SrDNA序列 ，系统发育分析 中图分类号 ：Q939 文献标识码 ：A 文章编号 ：0001．6209 (2004)03—0382—40 利用微生物进行金属矿石 的浸 出具有悠久 的历史 ，在现 用 Starky液体培养基 。菌的分离用 Starky．Na2S2O3固体培 代化工业生产 中也开始得到应用 。生物冶金 同化学冶金方 养基 ]。菌株 的能源利用研究用基础培养基 ]，该培养基用 法相 比，环境污染小，能耗低 ，浸矿成本低 ，尤其在处理低 品 lmol／L的硫酸调 pH至2．5。 位矿石时 ，具有很大潜力 …。 1．3 酶 和试 剂 能够进行生物浸矿 的微生物主要是一些在酸性环境 中 蛋 白酶 K、TaqDNA聚合酶购 自Promega公司 ；凝胶 回收 生长的铁或硫氧化细菌 。长期 以来 ，人们一直 以为生长温度 试剂盒 (E．z．N．A GelExtractionKit)购 自OmegaBio—Tek公 在25℃ 一30℃的中温菌 ，如氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillusfer— 司 ；DNA测序试剂盒 (CEQ DTCS—QuickStartKit)购 自Beck． rooxidans)、氧化硫硫杆菌(Thiobacillusthiooxidans)等在浸矿过 man公 司 。 程 中起主要作用 。近些年对连续反应浸矿系统 的微生物种 1．4 菌种的分离和形态观察 群研 究结果显示 ，一些最适生长温度为 40℃～45℃的中度 嗜 将采集到的酸性水样先用 Starky液体培养基 ，在 40~C富 热细菌 ，如氧化亚铁钩端螺旋菌 (Leptospirillumferrooxidans)、 集培养一周 以上 。待培养基 的pH下降到 1．0左右 ，用梯度 喜温硫杆菌 (Thiobacilluscaldus)等为浸矿细菌 中的优势种群 。 稀释法 ，在 Starky—Na2S2O