自身抗原变构肽在实验性关节炎治疗中作用的研究.pdfVIP

自身抗原变构肽在实验性关节炎治疗中作用的研究 赵金霞，李茹，何菁，史晋霞，栗占国 北京大学人民医院风湿免疫科/ 临床免疫中心，北京（100044 ） E-mail:zgli98@ 摘 要：目的：研究以丙氨酸替换CII263-272 序列中的 267 、270 、271 位氨基酸的变构肽 鼻粘膜给药对胶原诱导性关节炎(CIA)的抑制作用。方法: 以牛CII 免疫Lewis 大鼠诱发CIA。 于发病的当天开始给予CII 变构肽鼻滴入治疗，连续每天给药，5 天后，改为隔天给药，对 照组分别给予CII 原型肽和PBS 治疗。观察关节肿胀情况记录关节炎评分以及体重的改变。 治疗结束后处死大鼠，行后踝关节病理切片，观察关节病理改变。ELISA 方法检测血清中 抗CII 抗体亚型以及细胞因子的变化。结果：1、变构肽显著降低CIA 大鼠体内抗CII 抗体 IgG2a 亚型的滴度，并降低血清中γ-干扰素（IFN-γ）水平。2 、实验结束时CII 变构肽治疗 组、原型肽治疗组以及PBS 治疗组大鼠关节炎评分分别为2.50±2.43 、4.50±2.23 和6.33±2.73 （变构肽治疗组与PBS 治疗组比较，P0.05 ），各组大鼠后踝关节病理学评分分别为 1.33±1.07、2.17±0.94 和2.83±0.58 ，与对照组相比，CII 变构肽可以明显抑制CIA 关节病变 的发展（P0.05 ）。结论：CII 变构肽鼻粘膜给药治疗抑制了CIA 大鼠体内IgG2a 型抗CII 抗体的产生，并降低血清中IFN-γ，抑制Th1 型免疫反应，从而抑制了CIA 的发展。 关键词：关节炎，胶原性；变构肽； II 型胶原 类风湿关节炎（RA ）是一种慢性全身性自身免疫病，患者主要表现为多关节滑膜炎症 引起的关节滑膜和软骨破坏，最终导致关节畸形、功能障碍甚至致残，也可累及其他脏器。 在我国，RA 的患病率为0.32%-0.34% 。近年的研究证明RA 是一种抗原驱动及T 细胞介导 的全身性自身免疫病。RA 患者血清中存在多种自身抗原和自身抗体，但其发病的始动机制 不明确。其发病与抗原驱动的自身反应性T 细胞活化有关。抗原肽、HLA-DR1/4 以及T 细 胞受体 (TCR) 三分子间的特异性识别与结合参与了RA 发病的始动环节[1] 。研究证实II 型 胶原(CII)是RA 的自身抗原之一。CII263-272 是其主要的T 细胞抗原表位。其中263 位的苯 丙氨酸(F)和264 位的赖氨酸(K)是HLA-DR 结合位点，而 267 位的谷氨酰胺(Q)、270 位赖 氨酸(K)是主要的TCR 结合位点[2－4] 。本实验室通过替换CII 中与TCR 结合位点以及其临近 的氨基酸合成了一系列CII 变构肽，体外实验发现这些变构肽可以抑制CII263-272 原型肽刺 激的Th1 型细胞的活化作用[3－5] 。动物实验也发现皮下和静脉给予变构肽治疗均可以抑制胶 ， 原性关节炎(CIA)的关节炎症[6 7] 。本研究是在前期研究的基础上改进CII 变构肽的给药途径， 探讨其鼻粘膜给药对胶原诱导性关节炎的抑制作用。 1．材料和方法 1.1 多肽的合成 CII263-272 原型肽序列为FKGEQGPKGE 、CII263-272 变构肽为将CII263-272 原型肽 中267 位Q、270 位K 和271 位甘氨酸(G) 以丙氨酸(A)替换(FKGEAGPAAE)，由赛百盛公司 采用固相合成法合成，高效液相层析法纯化，纯度95 ％。所有多肽的氨基端添加十四烷酸 ，以促进多肽向细胞内转运。 1.2 CIA 大鼠动物模型的建立 30 只雌性近交系Lewis 大鼠，平均7 周龄，购自维通利华实验动物有限公司，饲养于 - 1 - 北京大学人民医院实验动物中心无特殊病原体(SPF)环境中。将牛CII(齐鲁制药馈赠)溶解于 0.1M 乙酸，与等体积