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11-05 高效率逆转录试剂盒 First Strand cDNA Synthesis Kit ReverTra Ace -α- (Code No. FSK-100,FSK-101) 使用说明书 科研用 TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN 目 录 【1】 简介1 【2 】 RT-PCR法的原理 2 【3】 试剂盒的组成 3 【4 】 操作步骤 5 【5】 添付引物的说明7 【6】 处理RNA过程中的注意事项 7 【7】 进行RT-PCR过程中的注意事项8 【8】 参考文献 8 【9 】 常见问题 9 【10】相关产品 11 【注意 】 本产品为科研用试剂。请勿作为诊断、临床试剂使用。此外，对于本产品的 有害性调查还不十分全面，因此，在使用过程中，请严格遵守实验室作业的一般 注意事项，适当使用保护用品，安全操作。 组分中的5×RT Buffer在溶解时，可能会出现白色沉淀现象，但不影响其品 质。此时，请使用振荡器等仪器使其混合均匀，等完全溶解后再使用。 【保存 】 •除Positive Control RNA以外，其他组分请均保存于-20℃条件下。 •Positive Control RNA请保存于-80℃条件下。 ※ Positive Control RNA由于运输过程中不能一直保证-80℃条件，在运输过 程中可能降解。建议用户选择人、鼠来源的Total RNA 作为Control RNA。 •为了保证实验效果，请在收到产品的一年之内使用完毕。 【1】 简介 将逆转录 (Reverse Transcription ；RT)反应和 PCR (Polymerase Chain Reaction) 反应组合在一起的 RT-PCR法，是能够比较简便和迅速地检测来自多 个样品的RNA的检测方法。所以，近年来作为一般的方法被广泛应用于mRNA 表达有无、表达量、长度的异常等RNA的分析和cDNA克隆中。 本公司利用基因工程学的方法改变了来自 MMLV (Molony murine leukemia virus) 的逆转录酶，使阻碍合成长链 cDNA 的 RNase H失活，成功 开发了大幅度提高 cDNA合成能力的改良型酶ReverTra Ace 。 ReverTra Ace -α-(Code No.:FSK-100,FSK-101)是以ReverTra Ace为核 心酶的First strand cDNA合成试剂盒。由于本试剂盒包含了RT用引物及Positive Control，所以能够简单地进行逆转录反应。也可以应用于手头上各种DNA聚合 酶的PCR反应模板的制备。例如，通过和High fidelity PCR用酶，Long PCR用 酶等的结合，能够进行目的性更强的RT-PCR。 ◆ 本产品特征 ◆ 1. 高cDNA合成能力 本产品中使用的ReverTra Ace是大幅度提高cDNA合成能力的改良型酶,已 确认能够合成14kb以上的cDNA 。 2. 高检测灵敏度 由于对ReverTra Ace -α-进行了最优化处理，即便带入全量的逆转录反应 液也不会对PCR反应造成阻碍，所以可以使用各种DNA聚合酶，在同一个离心 管中进行RT反应和PCR反应。 1 东洋纺（上海）生物科技有限公司 【2 】 RT-PCR 法的原理 RT-PCR法，如图1所示