人羊膜上皮细胞原代培养和肝细胞特异性蛋白的表达.pdfVIP

上 海 交 通 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) ( ) ·303 · Vo l. 29 N o. 3 M ar. 2009 Journal of Shanghai J iaotong U n iversity M edical Science 文章编号 : 　0258 - 5898 (2009 ) 03 - 0303 - 04 ·论 　著 · 人羊膜上皮细胞原代培养及肝细胞特异性蛋白的表达 许珊珊 , 　顾学范 (上海交通大学 医学院新华医院　上海市儿科医学研究所内分泌遗传代谢病研究室 ,上海 　200092) ( ) 摘 　要 : 目的 完善人羊膜上皮细胞 A EC s 的原代培养技术 ,检测肝细胞特异性蛋白在 A EC s中的表达 。方法 采用胶原酶 胰 ( ) 蛋白酶联合消化法分离获取 A EC s并进行原代培养 。分别向培养液中添加 10、20、40 ng/mL 表皮生长因子 EGF 和 10 ng/mL 的 ( ) 碱性成纤维细胞生长因子 bFGF ,倒置显微镜观察细胞生长和增殖情况 ,从中选择最适宜 A EC s原代培养的细胞培养液 。以 培养液中未添加生长因子的原代培养细胞作为对照 。将羊膜组织石蜡切片和 A EC s细胞爬片进行免疫组化染色 ,检测 4 种肝 ( ) ( ) α ( ) α ( ) 细胞特异性蛋白的表达 ,分别为白蛋白 A lb 、细胞角蛋白 - 18 CK18 、 - 1 - 抗胰蛋白酶 AA T 和 - 1 - 甲胎蛋白 A FP 。 结果 经胶原酶 - 胰蛋白酶联合消化法获得大量较纯的 A EC s, 间杂少数间充质细胞 。当细胞培养液中添加 10 ng/mL EGF 时 , A EC s生长和增殖速度显著加快 ,故最终选择添加 10 ng/mL EGF配制细胞培养液 。免疫化学染色显示 ,羊膜组织和体外传代培 养的 A EC s中均有 A lb、CK18、AA T和 A FP表达 。结论 胶原酶 - 胰蛋白酶联合消化及培养液中添加 10 ng/mL 的 EGF 是 A EC s 较为适宜的原代培养方法 。人羊膜组织及体外培养 A EC s能表达肝细胞特异性蛋白,提示 A EC s具有肝细胞的部分生物学特性 。 α α 关键词 : 羊膜上皮细胞 ; 　肝细胞 ; 　白蛋白; 　细胞角蛋白 - 18; 　 - 1 - 抗胰蛋白酶 ; 　 - 1 - 甲胎蛋白 中图分类号 : Q 51　　　　文献标志码 : A Pr im ary culture and hepa tocelluar spec if ic prote in expr