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双歧杆菌培养基的优化 及pH调控培养研究 小组成员：黄博、王燕波、丁胜裕、徐哲、胡群 双歧杆菌 Bifidobacterium是1899年由法国学者Tissier从母乳营养儿的粪便中分离出的一种厌氧的革兰氏阳性杆菌，末端常常分叉，故名双歧杆菌。 双歧杆菌是人和动物肠道的重要生理性有益菌，与肌体的健康状况密切相关，具有抑制肠道病原菌生长、改善蛋白质代谢、提供维生素、降低胆固醇、提高免疫机能等生理功能。 一、概述 概述 概述 双歧杆菌是一类不能游动的革兰氏阳性菌，无芽孢，存在于暖血动物和人的肠道中。 其特点为：专性厌氧菌，对氧非常敏感； 对低pH值的抵抗能力差； 对营养要求苛刻； 活性保持比较困难。 因此在双歧杆菌研制开发中，如何在较短培养时间内提高活菌数目，就成为了关键技术，选择适当的培养基及培养工艺对双歧杆菌的产量有显著影响。 双歧杆菌的营养要求复杂，而牛乳中含有双歧杆菌生长所必需的营养成分和生长促进因子，所以双歧杆菌在牛乳中能很好地生长发酵。 但在我国，牛乳的供需矛盾突出，牛乳的供应量极为不足，所以，根据我国的国情，选择合适的基质来替代牛乳，使双歧杆菌在其中能很好地生长发酵，应该是一个亟待解决的课题。 概述 （常用）脱脂牛乳培养基：以脱脂乳粉制成复原乳，全乳固体含量12.5%，pH自然，0.07MPa灭菌20min。 可替代培养基： 培养基1：蛋白胨5.0g，牛肉膏5.0g，胰蛋白胨10.0g，酵母浸出粉5.0g，葡萄糖10.0g，吐温-80 1.0mL，K2HPO4 2.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，ZnSO4·7H2O 0.25g，MgSO4·7H2O0.1g，加蒸馏水至1000mL。调pH值为7.0，0.10MPa灭菌20min。 培养基2：大豆蛋白胨16.7g，酪蛋白胨8.3g，乳糖10g，酵母浸出粉5g，加蒸馏水至1000mL。调pH值为7.0，0.10MPa灭菌20min。 培养基3：酪蛋白胨10g，酵母浸出粉2.5g，葡萄糖5g，大豆蛋白胨5g，吐温-80 1.0mL，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g，混合盐溶液5mL，蒸馏水995mL；混合盐溶液：K2HPO4 20.0g，MgCl2·6H2O 5.0g，ZnSO4·7H2O 2.5g，CaCl21.5g ，FeC13 0.5g，加蒸馏水至100mL。调pH值为7.0，0.10MPa灭菌20min。 概述 二、操作方法 菌种活化 活菌数的测定 pH值的测定 培养基比较试验 培养基的优化 pH调控培养 生长曲线的测定 方法 方法 三、比选结果 比选 四、优化结果 优化 五、 pH调控培养研究 pH值 1、双歧杆菌在优化培养基与基础培养基中的生长及pH值变化 2、pH调控培养 pH值 pH值 六、结论 （1）优化培养基为在比选出的基础培养基中加0.5%低聚果糖和1% 碳酸钙。优化培养基较比选出的基础培养基双歧杆菌活菌数提高约8.1 倍，培养时间缩短4h。双歧杆菌利用优化培养基在37.5℃厌氧培养20h，活菌数可达8.9×109cfu/mL。 （2）在双歧杆菌培养过程进行pH值调控培养，用6mol/LNaOH调节培养液，厌氧条件下37.5℃培养24h活菌数达到1.7×1010cfu/mL，用2mol/L Na2CO3调节培养液，厌氧条件下37.5℃培养24h活菌数达到9.7×109cfu/mL。 结论 参考文献 邵建宁，张文齐，麻和平等.双歧杆菌培养基优化及pH调控培养研究[J]. China Brewing ， 2010 ， 216（3） ：122-124 罗珍兰，谢继志，王庆明.双歧杆菌和乳酸菌在不同基质中混合发酵的情况比较[J].食品工业科技，1997( 4) ：50-53 刘树兴，张明.双歧杆菌最佳培养条件的研究[J].科学研究， 2007，28( 3) ：47-49 田寒友，任发政.双歧杆菌BBMN02培养基优化及发酵罐补料分批培养[J]. 中国乳业，2008，10( 4) ：50-53 韩雪，张兰威.双歧杆菌增殖因子的筛选及培养基的优化[J].食品与生物技术学报，2005，24( 4) ：69-72 谢谢！