大熊猫微卫星DNA的筛选与其应用.pdfVIP

维普资讯 (孕) ∈({) 弓l一；％ CN 53—1040／Q 1SSN 025,1—5853 。。。。 ‘。 ／厂I’＼／，／’＼．、＼ ＼ ＼ ． ／ 大熊猫微卫星 DNA的筛选及其应用 张亚平 王 文 宿 兵 O}iverA ．Ryde,r _。 _ —— — — — 一 ， 中国科学院昆明动物研究所细胞与分子进 (ZoologicalSocietyofSanDiego，USA) 化开放研究实验窜 昆明 650223) 童查曼 张和 民 何廷美 ． 中国林业部 北京) (卧龙大熊猫繁殖 中心 四川) Q l8蟋 摘要 经 DpnⅡ限制酶消化大熊猫基 固组 DNA后 ，选取 】5O一5O0b口大小的片 段掏建 了DNA文库。用合成的 (cA)．探针从这一文库 中克隆筛选 了 IO个大熊猫特异 的微卫星 DNA座位 在测定 DNA 序列的基础上设计并合成 了 l0个座位特异的引 物，以PCR技术扩增了 7份抽提 自组织细胞和 6份抽提 自毛发的大熊猫 DNA样品。 发现除座位 g彻 外，其余 9个座位均呈 多态性，而且所有座位均为偶数碱基的长度变 异。对有准确谱系记录的家系的研究结果证明，这 10十微卫星 DNA座位严格按孟德 尔方式遗传。因而这些座位能有效地应用于大熊猫的亲子鉴定，从而为建立各地太熊 猫谱系和制定有效的繁殖计划提供了 一个有效的遗体学手段。根据这 l0个微卫星座位 的分析．我们澄清 了两组术知的父系关系。 关键词大熊猫微卫星DNA童三竺塞 带远 大熊猫 (Aituropodametanoteuca)是世界 上最濒危和最受欢迎 的动物之一，其数量仅 1000只左右，割裂分布于我国四Jrl、甘肃和陕西 3省 。大熊猫的保护受到我国及国际社 会的广泛重视 (OBrien等，1994) 目前，约有 l()(】多只大熊猫饲养于动物园中。在繁殖 季节，为 了最大限度地增加雌猫的受孕机会，常采用一雌多雄、 自然交配与人工受精并行 等方式。伴随而至的问题是，由此产生的大熊猫有时具有 2—3个可能的父亲有待确定(赵 庆 国等，1993)。为了评估 自然交配与人工受精的相对成功率、确定生殖能力强盛的雄性 熊猫 以及计算圈养群体 中的起源基因数，急需鉴定这些未知的父一子关系(Kleimant等， 1991 OBrien等 曾用血液蛋 白电泳技 术鉴定了 1只大熊猫的父亲(oBrien等，l984)。 但是，这种方法受到灵敏度和样 品来源 的双重限制。建立高灵敏 、易于操作和非损伤性 (non—invasive)的方法，将使亲子鉴定技术更为实用。尤其重要的是，非损伤性途径将使 野生大熊猫 自然群体的研究成为可能。这是计算大熊猫有效群体大小(Ne)和近亲交配系数 的基础 。 · ·美 国圣地亚哥动物}办会 ，中国科学院重点项 目以及云南省应用基础研究基盘资助 奉文 l995年 4月 l0臼收到，同年 5月 24日修回 维普资讯 ()