7-饥饿与饱食对肝糖原的影响.ppt

饱食和饥饿对白鼠肝糖原含量的比较 【试剂与器材】 1.小白鼠（饥饿与饱食，一组各一只）。 2.白瓷盘、手术剪 3.研钵、漏斗、滤纸 4.低速常温离心机（KA-1000) 5.离心管 6.试管及试管架、烧杯 7.恒温水浴锅 8. 5%三氯醋酸溶液, 0.3%碘液, 95%乙醇, 20%NaOH溶液,浓盐酸溶液,班氏定性试剂 离心分离技术 离心试管盛放的溶液不能过多。 离心管等重（连同套管）、对称放入转子，以保持离心机的平衡。 将离心机盖好，开机，缓缓调速旋钮，逐步加速至所需的转速（开机前，调速旋钮应置零）。 离心完毕，将调速旋钮降低至零，关机，待离心机停稳后才可开盖取物。切勿用手或其他物件强行减速 * 【目的】 掌握糖原合成的主要影响因素，熟悉糖原与葡萄糖的定性鉴定方法。 掌握低速常温离心机的使用，了解离心技术。 肝糖原是由许多葡萄糖分子聚合而成的物质，是动物机体能迅速动用的糖储存形式之一。 【原理】 肝糖原含量定性比较 【原理】 提取:用三氯醋酸破坏肝组织的酶和蛋白质，使其沉淀而保留糖原，再用乙醇将糖原从滤液中沉淀出来，溶于热水中，即为糖原溶液。 糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色； 性质 经酸水解可生成还原性的葡萄糖，后者可将碱性铜溶液(班氏试剂)中二价铜还原成氧化亚铜。利用上述性质，进行饱食与饥饿肝糖原的比较。 小白鼠 肝 脱颈处死 脱颈处死 右手抓住鼠尾用力向后拉,同时左手拇指与食指用力向下按住鼠头。将脊髓与脑髓拉断，鼠便立即死亡。 【操作】 小白鼠 肝 脱颈处死 5％三氯醋酸6mL, 匀浆 过滤 滤纸先润湿 滤液等体积乙醇 混匀后，静置3-5分钟,3000rpm,离心3min 弃上清，沉淀加5mL H2O 比较滤液浑浊度 观察、对比溶液现象 取该液2mL 0.3％碘液2滴, 混匀 观察、记录颜色，与对照组对比 取该液2mL 加盐酸10滴，沸水浴10min; 冷后，20％NaOH20滴中和 可加热助溶 冷却 取水解液5滴 加班氏液1mL,混匀，沸水浴3min 观察、记录现象，与对照组对比 空白对照、饥饿组与饱食组 小白鼠 肝 脱颈处死 5％三氯醋酸6mL, 匀浆 过滤 滤液等体积乙醇 混匀后，3000rpm,离心3min 弃上清，沉淀加5mL H2O 观察、对比溶液现象 取该液2mL 0.3％碘液2滴, 混匀 观察、记录颜色，与对照组对比 取该液2mL 加盐酸10滴，沸水浴10min; 冷后，20％NaOH20滴中和 冷却 取水解液5滴 加班氏液1mL,混匀，沸水浴3min 观察、记录现象，与对照组对比 离心技术就是利用离心机的转子高速旋转时产生的强大离心力，使置于该旋转体中的悬浮颗粒发生沉降或漂浮，从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离的目的。 操作要点： (1) 离心机为高速旋转设备，放置必须绝对平衡。 (2) 在启动离心机时，应检查开关是否在零位，调速器是否在零或在转速较小处，用手轻轻转动转轴看是否能自由旋转。 (3) 离心机的金属(或塑料)离心套管必须完整，管底应垫好软垫(棉花或胶垫)。 (4) 使用完毕，必须用干布擦净离心套管内的液体。 (5) 在使用中如发现声音不正常或振动异常，应立即切断电源，待检查修复后再使用。 (6) 操作人员不得远离工作中的离心机。 离心操作注意事项： 实验结果 空白对照 饱食组 饥饿组 加入班氏试剂 加0.3%碘液 糖原沉淀量 滤液浑浊度 饥饿和饱食对小白鼠肝糖原含量的影响 项目 处理 每位同学根据自已和同组同学的结果，综合记录并讨论。 *