2014-2015学年高二生物课件：第一部分实验二《微生物的培养和利用》课件1（浙科版选修1）[ 高考].pptVIP

实验２　分离以尿素为氮源的微生物 实验原理： 脲或称尿素，是蛋白质降解的产物。人和其它哺乳动物的尿中都含有尿素，有一些细菌含有脲酶，它们可以通过降解尿素作为其生长的氮源。选择以尿素作为唯一氮源即可分离出此类微生物。 实验方法： 制备LB完全营养培养基和尿素为N源的培养基，分别培养土壤中的微生物。 在完全营养培养基上菌落多，在尿素为N源培养基上只能生长少数的菌落，即能利用尿素的细菌。 设备及用品： 1、250mL的三角瓶2个 2、有盖试管5支（15mm×150mm）、试管架 3、培养皿4个 4、超净台 5、移液器 6、玻璃刮刀 7、酒精灯 8、200mL烧杯1个 步骤： 1、制备培养基：在60℃左右时，将两只三角瓶中已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基，在酒精灯旁分别倒入两个培养皿中，在水平的超净台上摇匀，平放至凝固 步骤： 2、制备细菌悬液。在无菌条件下，将1g土样加到有99mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即成10－2土壤稀释液。依此法制备10－3、10－4和10－5的土壤稀释液。 步骤： 3、用涂布分离法分离细菌。取10－4和10－5土壤稀释液各0.1mL，分别加入到LB培养基和尿素培养基中，用玻璃刮刀将菌液涂布到整个平面上 步骤： 4、培养细菌。将培养甲倒置，在37度恒温箱中培养24—48h，观察菌落数 5、观察。全营养培养基中菌落较多，尿素培养基只有少量菌落。 思考与练习： 1、为什么要用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基？ 答：琼脂是未被纯化的混合物，内含一定的含N化合物，用琼脂糖替代琼脂后，微生物只能以尿素为唯一N源，利于对细菌的筛选。 思考与练习： 有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？ 此类细菌使废弃物降解形成氨后将其利用，防止尿素在自然情况下高温水解形成氨，并进一步形成一些化合物，使土壤板结 思考与练习： 3、有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现？ 此细菌能分解尿素产生氨，氨为碱性，酚红指示剂在碱性下为红色，标志着存在脲酶水解尿素的作用，红色区域大小代表脲酶活性强弱和含量的多少。 思考与练习： 4、与全营养培养基上的菌落数比较，为什么尿素培养基上只有少数菌落？ 答：说明能利用尿素的细菌只占少数。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *