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42卷2期 微 生 物 学 报 Vnl42 ^u．2 龇年4月 Ac缸舭m№如g扣Ⅱ舶l缸4 A叩l 2(J(】2 限制和修饰系统砌BⅢ在构建抗噬菌体菌株中的作用 孔 健1 马桂荣1 J”teJ0s印hsen2 (1山东大学微生物技术国家重点实验室济南250100 (2丹麦皇家畜牧农业大学乳制品和食品科学系丹麦】 关键词：乳酸乳球菌，噬菌体，限制和修饰系统，乳制品发酵 中田分粪号：Q933 文献标识码：A 文章编号：000l·6209(2002)02一0246·05 限制和修饰(陀“一ctionand皿础6ca“on．ⅣM)系统是指由限制性内切酶和甲基化酶组成的单亚基或 多亚基复合酶系统，两者通常成对出现，具有相同的DNA识别位点，其作用相反。R，M系统在脖’棱生物 中普遍存在，在保护细胞免遭外源病毒侵害方面具有重要作用“。 作为发酵剂的乳酸乳球菌在乳制品发酵中具有霞要作用，但这类菌株楹易遭受噬菌体感染，导致菌 株产酸力降低，甚至发酵失败，造成严重的经济损失。所以在乳制品发酵过程中防止噬菌体感染就成为 }分重要的问题。 通过自然筛选或诱变处理等手段筛选噍茁体不敏感突变株以及利用基因克隆技术构建抗噬菌株菌 株在发酵过程中起到了良好的抗噬菌体感染效果””。质粒nlw566分离于乳酪发酵荆乳酸乳球菌 (J小眦D曲Ⅱ￡赫m】bBp㈣击)w56[4]，发现携带有一种新的编码限制和修饰(～M)系统的基圉“ⅡBI Ⅱ01(G∞8柚k注册号为AB47071)．本文通过电转化方法将R，M系统￡如BⅢ导人到不问的乳酸乳球菌 中，分析含有R，^f系统LkBIII的工程菌株对噬菌体的抗性。 1材料和方法 l_l首株、噬菌体和培养基 1．I．1 菌株和噬菌体：本实验所有菌株和噬菌体列表于1。 1 1 2培养基：乳酸乳球菌培养基(GMl7)为M17培养基(Dl忙o)，加0．5％葡萄糖；转化培养基(sG川7) 为M17培养基，加1％葡萄精，25mmol儿Mgck，2．5m啪ⅣLcacl：，5pg，mL氯霉翥；嘴菌体感染培养基为 cMl7培养基加5mm01儿cacl，。 1．2质粒蜊A的提取 GlA— 工￡础培养刊指数生长期，离心收集菌体。菌体细胞用lom—mL溶葡酶37℃酶解20min，片j GEN kit(clIatswonh，usA)，按照实验说明提取质粒DNA。 plasmidMini—p陀p 1．3嚏蕾体效价(e∞dency 0f山血g，EoP)的舅定 噬菌体在抗性菌株中的噬菌斑数与在敏感菌株中的嘴菌斑数之比，敏感菌株的EOP为l。噬菌斑 的测定采用双层平板法。 1．4电转化 PLdBer(BioRad公司产品)，脉冲参数1．25kV／n㈣，25∥ 参见Hnk和Nes的方法”1。电穿孔仪为cene 和200n。 作者简介：孔健(1964)，女．山东菏泽人，山东大学微生物技术国家重点实验室副教授．博士，主要从事乳酸菌 应用基础性研究。 收羲日期：2001．11舶．修回日期：2∞1-12一t9 万方数据 2期 孔健等：限制和修饰系统LlnmII在构建抗噬菌体菌株中的作用 247 2结果 2．1 含