用基于TaqMan探针的Real_timePCR技术定量检测副溶血弧菌.pdfVIP

45 卷 　4 期 微 生 物 学 报 Vol. 45 No. 4 2005 年 8 月 Acta Microbiologica Sinica August 　2005 用基于 TaqMan 探针的 Realtime PCR 技术 定量检测副溶血弧菌 1 2 1 蔡潭溪 　蒋鲁岩 　黄克和 ( 1南京农业大学动物医学院　南京　210095 ) (2 江苏省出入境检验检疫局　南京　210001) 摘 　要 :副溶血弧菌是一种引起食源性疾病的重要病原菌 ,传统的鉴定方法费时费力且容易出现假阴性 ,建立一种 定量检测副溶血弧菌基因的方法尤为重要。根据 GenBank 公布的副溶血弧菌的 gyrB 基因序列设计一对引物和 ( ) TaqMan 探针 ,建立了基于 TaqMan 探针的 Realtime PCR 方法。通过对 9 种细菌 12 株菌株 的DNA 进行扩增 ,结果 所有 4 株副溶血弧菌均可产生扩增曲线 ,其他 8 株非副溶血弧菌均不产生扩增曲线 ,证明了引物和探针具有很高 的特异性。细菌纯培养物品和人工布菌的检测敏感度分别为 1 CFUPCR 反应体系和 10 CFUPCR 反应体系 ,相关 系数均为 099 ( r2 = 099) ,整个试验可在 1h 内完成。建立的方法可用于海产品中副溶血弧菌的快速定量检测。 关键词 :TaqMan 探针 ,Realtime PCR , 副溶血弧菌 gyrB 基因 ,定量检测 中图分类号:Q81 　　文献标识码 :A 　　文章编号 (2005) ( ) 　　副溶血弧菌 Vibrio parahaemolyticus 是一种引起食源性 [1 ] 1 　材料和方法 疾病的重要病原 ,可导致患者出现腹泻、肠痉挛、恶心、呕 吐、发烧等典型胃肠炎反应。研究数据表明 ,50 %～70 % 因 11 　材料 [2～4 ] ( 食用海产品引发的腹泻病例是由副溶血弧菌引起的 。 111 　菌株 : 副溶血弧菌 V. parahaemolyticus 20562 , V. 传统的培养鉴定方法需要较长时间的培养和选择性增菌 ,且 parahaemolyticus 20568 , V. parahaemolyticus 20570 , V. 容易出现假阴性 ,因为在营养不足或应激的情况下 ,副溶血 parahaemolyticus 20572) 购于上海市疾病控制中心 ;创伤弧菌 ( ) (